[发明专利]烟草中甾醇的测定方法

摘要

本发明公开了烟叶中甾醇的测定方法，包括以下步骤：1）配置不同浓度的含内标的甾醇标准样版，经衍生化后进行GC－MS分析；用甾醇与内标峰面积比值与甾醇与内标浓度比值作图获得标准曲线；2）将待测样品分别经酸水解、碱皂化以及直接超声萃取，衍生化后取1μL进行GC—MS分析；3）用测得的甾醇与内标峰面积比值在标准曲线中读出甾醇与内标浓度比值，再计算出甾醇量。本发明可以同时分析烟叶中多种形态的胆甾醇、麦角甾醇、菜油甾醇，豆甾醇和β-谷甾醇，测试准确、操作简便，可以广泛应用在烟草行业中。

主权项

一种烟叶中甾醇的测定方法，其特征在于，按照以下步骤进行：步骤1：配置以二氯甲烷为溶剂、甾醇浓度分别为16、32、64、128、256μg/mL，内标浓度均为10μg/mL的系列标准溶液作为样板；取上述标准溶液200μL经过0.45μm滤膜过滤后，用氮气吹干，加入200μL的双（三甲基硅烷基）三氟乙酰胺以及2μL的三甲基氯硅烷，于80℃加热45～60min进行衍生操作，取1μL进行GC—MS分析；用上述系列标准溶液中各甾醇的含量与内标量之比对色谱图中各甾醇峰面积与内标峰面积的比值作图，得到标准曲线；步骤2：将待检测烟叶置于烘箱中40℃下烘干至恒重，粉碎，过40目筛，称取0.5g烟末样品于50mL圆底烧瓶中，加入200μg内标及2.5mL、4mol/L HCl的乙醇溶液，在80℃水浴中加热回流60min，结束后用水浴冷却至室温，并在上述酸水解得到的溶液中或在加入含有200μg内标的0.5g烟末样品中加入7mL、4.0mol/L氢氧化钾的乙醇溶液，在80℃水浴中加热回流120min，结束后冷却至室温，取2mL上述皂化液加入5mL正己烷和1mL去离子水，室温下超声振荡10min，取2mL正己烷萃取液，用氮气吹干，加入200μL双（三甲基硅烷基）三氟乙酰胺以及2μL三甲基氯硅烷，于80℃加热45～60min进行衍生操作，取1μL进行GC—MS分析；步骤3：取0.5g烟末样品于25mL试管中，加入100μg内标及10mL二氯甲烷，超声萃取45min，取4mL过0.45μm有机膜，用氮气吹干，加入200μL的双（三甲基硅烷基）三氟乙酰胺以及2μL的三甲基氯硅烷，于80℃加热45～60min进行衍生操作，取1μL进行GC—MS分析；步骤4：根据标样色谱图、标样加入和对照保留时间的方法进行定性，用内标法定量。