[发明专利]从咖啡果中分离2-(4-甲氧基苯氧基)-丙酸的工业化方法

摘要

本发明公开了从咖啡果中分离2-(4-甲氧基苯氧基)-丙酸的工业化方法。先选择咖啡子叶作为外植体，诱导愈伤组织产生，将经过原生质诱变育种的咖啡树所结的咖啡果实干燥、粉碎，用含水乙醇回流热提，滤去滤渣，提取液真空浓缩至无醇味；后经溶剂脱脂，水层再用水饱和的正丁醇萃取，减压浓缩并干燥得粗提物；待用热水溶解后，上大孔吸附树脂柱，先后用水和乙醇洗脱；减压回收乙醇，真空干燥或喷雾干燥，最后在酸性条件下进行2～3次重结晶，产品纯度高达99.9％以上。2-(4-甲氧基苯氧基)-丙酸对各种糖和甜味物质都有很好的甜味抑制作用，可作为新型食品添加剂应用于月饼、糖果、蜜饯中以抑制过高的甜味。

主权项

从咖啡果中分离2‑(4‑甲氧基苯氧基)‑丙酸的方法，其特征在于包括如下步骤：(1)选择咖啡子叶作为外植体，诱导愈伤组织产生：咖啡子叶经过消毒，接种于添加1～10μmol/L 2，4‑二氯苯氧乙酸作为生长素和0.4～0.5μmol/L 6‑呋喃甲基腺嘌呤作为细胞分裂素的MS基础培养基上，温度为25～30℃，培养3～5周，产生愈伤组织，愈伤组织经过继代培养后，挑选优选质地松散、颜色黄白、表面湿润的颗粒状愈伤组织，生长良好的愈伤组织培养形成细胞悬浮培养体系，用Co60r射线以4000r、7000r、10000r、15000r、20000r和25000r五个不同辐射剂量进行辐射处理，筛选出2‑(4‑甲氧基苯氧基)‑丙酸含量高的培养物，分离出原生质，近一步培养获得完整植株，获得遗传性稳定一致的突变咖啡种苗品种PK；该品种咖啡果实中的2‑4‑(甲氧基苯氧基)‑丙酸平均含量达到0.2％～0.8％；(2)将经过步骤(1)原生质诱变育种的咖啡树所结的咖啡果实干燥、粉碎，过60～80目筛，用重量浓度为60％～95％的乙醇回流提取2～5次，每次回流1～4h；滤去滤渣，提取液真空浓缩至不含乙醇，用60℃～90℃热水溶解后溶剂萃取2～5次；所述的溶剂为石油醚、乙醚、乙酸乙酯、正己烷、环己烷、氯仿和/或二氯甲烷；(3)水层用水饱和的正丁醇萃取2～5次，合并萃取液，减压浓缩并干燥得2‑(4‑甲氧基苯氧基)丙酸粗提物；(4)将粗提物用60℃～90℃热水溶解，上大孔吸附树脂柱，先用2～5倍柱体积的水洗，弃去洗脱液，再用2～5倍柱体积的重量浓度为10％～40％的乙醇洗脱，弃去洗脱液，最后用2～5倍柱体积的质量浓度为40％～80％的乙醇洗脱，收集洗脱液；(5)减压回收乙醇，真空干燥或喷雾干燥得2‑(4‑甲氧基苯氧基)‑丙酸精提物；(6)精提物在pH＝2‑6的酸性条件下进行2～3次重结晶，制得2‑(4‑甲氧基苯氧基)‑丙酸。