[发明专利]一种基于标准样品的实时荧光PCR相对标定方法

摘要

本发明涉及一种基于标准样品的实时荧光PCR相对标定方法。现有技术中还未见实时荧光PCR标定方法。本发明方法包括标准样本的制作步骤、校准标准值的计算步骤、待标定仪器数据的检测步骤和确定标定结果步骤。本发明采用按测量范围等分的荧光粉末，能使荧光样本产生的荧光光强覆盖整个测量范围。

主权项

1.一种基于标准样品的实时荧光PCR相对标定方法，其特征在于该方法包括如下步骤：步骤一、制作标准样本1-1将待标定的实时荧光PCR仪最大量程进行n等分，然后取n个相同的透明样品试管，依次编号为1至n，其中n≥10；1-2取一个烧杯，在烧杯中加入e mg的荧光粉末和f ml的环氧树脂胶，搅拌均匀，使荧光粉末完全溶解在环氧树脂胶中，形成胶水混合物；然后取一个针筒，将s ml的胶水混合物注入第n号试管中，则该试管内的荧光粉末浓度δ_n为：δn=ef]]>为了使这n个试管的荧光强度依次线性增强，则第i号试管内荧光粉末的浓度为：δi=inδn=ienf,]]>其中1≤i≤n由此完成第i号试管后，烧杯中应加入的胶水体积Δv_i-1为：Δvi-1=nf-[i+(i+1)+...+n]si-1]]>从而得到荧光强度依次线性增强的n个试管；1-3把n个试管静置直至胶水完全凝固，从而完成第1至n号标准样本的制作；步骤二、计算校准标准值2-1打开已标定的荧光检测仪，调整光电倍增管增益，使仪器稳定；2-2把步骤一中得到的n个标准样本依次放入已标定的荧光检测仪中，得到一组标准荧光光强测量值a₁、a₂、···、a_n；再计算得到一组对应的校准标准值A₁、A₂···、A_n，其中A₁＝a₁/a_n、A₂＝a₂/a_n、···A_n＝a_n/a_n；步骤三、待标定仪器数据检测3-1打开待标定的实时荧光PCR仪，等待稳定仪器；3-2把步骤一中得到的n个标准样本放入待标定的实时荧光PCR仪中，得到一组测量值b₁、b₂、···、b_n；再计算得到一组对应的待标定测量值B₁、B₂···、B_n，其中B₁＝b₁/b_n、B₂＝b₂/b_n、···B_n＝b_n/b_n；步骤四、得出标定结果通过校准标准值数据组与待标定测量值数据组比对得到待标定的实时荧光PCR仪的各点偏差D_i和平均偏差d，从而完成实时荧光PCR相对标定；其中D_i＝|A_i-B_i|，