[发明专利]磁性载基因脂质超声微泡造影剂的制备方法

摘要

一种磁性脂质超声微泡造影剂的制备方法：配FeCl3和FeCl2溶液并加入烧瓶中，搅拌下滴加NH4OH，出现沉淀，熟化，取出生成物并冲洗，至其溶液pH=7，干燥后得Fe3O4磁性纳米粒；将Fe3O4干粉配成磁流体，弃上清，沉淀重悬于磷酸盐缓冲液，加PEI形成PEI/Fe3O4纳米粒子，将其与pEGFP-C1质粒DNA混合静置，得载基因Fe3O4磁性纳米粒子；将DSPC、DPPE、DPPA溶于氯仿和异丙醇为2：1的有机溶剂中，蒸发溶剂，剩脂质薄膜，以葡萄糖和丙二醇按4：1配置水合液加入瓶中，分散后形成脂质悬液，加入40mg的PEG4000，加热溶解，将DNA/PEI/Fe3O4和明胶加到脂质悬液中，加吐温800.01ml,置换西林瓶上方的空气，振荡后得载基因磁性脂质超声微泡。

主权项

一种作为既可影像增强又可对肿瘤进行治疗的磁性脂质超声微泡造影剂的制备方法，其特征在于：（1）用分析纯的FeCl3·6H2O和FeCl2·4H2O分别配制成0.1mol/L的FeCl3溶液和FeCl2溶液，按Fe3+:Fe2+=5:3分别加入100ml 0.1mol/L的FeCl3和60ml 0.1mol/L的FeCl2溶液于烧瓶中，在N2保护和磁力搅拌下滴加1.5mol/L的NH4OH，溶液中迅速出现沉淀物，继续滴加NH4OH至反应液的PH=9，沉淀物由红褐色逐渐转变为黑色，继续搅拌30min后停止，于80℃水浴恒温30min进行熟化，然后用强磁铁吸住烧瓶底部，倾去上层废液，用去离子水反复冲洗生成物，至其溶液PH=7，将生成物真空干燥得Fe3O4磁性纳米粒，（2）将Fe3O4干粉溶于5g/L草酸溶液中配成质量分数为4%的磁流体，超声分散后高速离心弃上清，沉淀重悬于磷酸盐缓冲液中，边超声边缓慢加入适量PEI充分混匀，超声1 h，磁力搅拌2 h，使反应充分形成稳定的PEI/ Fe3O4纳米粒子，用蒸馏水、乙醇反复洗涤，干燥后将PEI/ Fe3O4纳米粒子与pEGFP‑C1 质粒DNA按15：1的质量比充分混合，室温静置30 min，得载基因Fe3O4磁性纳米粒子，（3）将DSPC(二硬脂酰磷脂酰胆碱)、DPPE(二棕榈酰磷脂酰乙醇胺) 、DPPA（二苯基磷酰基叠氮化物）按1：1：1的比例溶于氯仿和异丙醇为2：1的有机溶剂中，超声20min使其充分溶解，于85°C水浴中加热30min使有机溶剂蒸发完全，在西林瓶底部形成一脂质薄膜，以葡萄糖和丙二醇按4：1比例配置的水合液加入此西林瓶中，超声分散30min后使其形成充分的脂质悬液，在此悬液里加入40mg的PEG4000，60°C加热使其完全溶解，将一定量DNA/ PEI/ Fe3O4、和明胶按2：1比例加入到脂质悬液中，后加吐温80 0.01ml,使总体积为西林瓶的1/3，用5ml注射器充入1ml的SF6气体后置换西林瓶上方的空气，将此西林瓶放入频率4500HZ的机械振荡器中振荡60s，即得载基因磁性脂质超声微泡。