[发明专利]一种检测饲料中植酸酶活性的方法

摘要

本发明涉及一种检测饲料中植酸酶活性的方法，属于饲料的化学成分分析技术领域。该方法通过一种新的提取液、稀释液以及检测流程，将饲料中的植酸酶完全浸提出来，同时消除了饲料中本身存在的无机磷对测定的干扰，检测结果的变异系数小，具有检测周期短、灵敏度高、重复性和准确性好的优点。

主权项

一种检测饲料中植酸酶活性的方法，其特征在于：包括如下步骤：(1)绘制标准曲线：准确称取0.6804g在105℃烘至恒重的基准磷酸二氢钾于100ml容量瓶中，用稀释液溶解并定容后形成磷标准溶液；将磷标准溶液用稀释液稀释成1.0、2.0、3.0、4.0、5.0mmol/L的溶液；各浓度溶液分别取2ml，37℃预热5min，加入6ml显色液，37℃保温30min，加入已预热至37℃的植酸钠溶液2ml，反应后在水浴中静置10min，4000r/min离心10min；取上清液，以空白为参比，在波长415nm处分别测定样品溶液的吸光值，绘制标准曲线；(2)样品处理：将含有植酸酶的饲料粉碎，0.45mm过筛，取0.5g入150ml锥形瓶中，加入50ml提取液，在摇床上振荡30min，4000r/min离心10min；(3)样品稀释液的制备：取步骤(1)所得的上清液0.5‑1.0ml入50ml容量瓶中，用稀释液定容，摇匀；(4)反应：取2ml样品稀释液，37℃预热5min，加入已预热至37℃的植酸钠溶液2ml，37℃保温30min，加入6ml显色液，反应后在水浴中静置10min，4000r/min离心10min；取上清液，以样品空白为参比，在波长415nm处测定样品溶液的吸光值；(5)用直线回归方程计算磷的含量，根据磷含量按下式计算植酸酶活性： U / g = C m × 30 × N 其中：U‑样品植酸酶活力，U/g；C‑样品溶液实测吸光值在标准曲线中对应磷的浓度(mmol/L)；N‑样品溶液反应前的总稀释倍数；m‑样品质量(g)；30‑反应时间，min；上述各步骤中：所述的提取液的配置方法如下：称取46.06g一水草酸钾，9.8g醋酸钾，于1000ml容量瓶中，加入950ml水溶解，用冰乙酸调节pH值至5.50，加入0.25g牛血清白蛋白溶解，用蒸馏水定容至1000ml，室温下存放1个月有效；所述的稀释液的配置方法如下：称取8.2g无水乙酸钠，0.25g牛血清白蛋白于1000ml容量瓶中，加入950ml水溶解，用冰乙酸调节pH值至5.50，并用蒸馏水定容至1000ml，室温下存放1个月有效；所述的植酸钠溶液的配置方法如下：称取0.9239g植酸钠、0.82g无水乙酸钠于100mL容量瓶中，加入90ml水溶解，用冰乙酸调pH值至5.50，并用蒸馏水定容；所述显色液的配置方法如下：在搅拌下将钼酸铵溶液缓缓倒入钒酸铵溶液中，用水稀释至750ml；其中，钼酸铵溶液为20g四水钼酸铵溶入于200ml水中而成，钒酸铵溶液为0.75g钒酸铵溶于100ml水中，缓缓加入85ml硝酸溶液而成。