[发明专利]混合奶牛性控冻精产品鉴定和检测方法

摘要

一种混合奶牛性控冻精产品鉴定和检测方法，属于动物生殖生物技术，混合奶牛性控冻精产品的鉴定方法包括奶牛性控冻精解冻、镜检，解冻后30分钟内，能观察到显示荧光的分离精子和未染色的异种动物混合精子，确认为混合奶牛性控冻精；依据造成动物性别差异的XY性染色体DNA特异性差异鉴定奶牛分离精子以外的混合精子种类；混合奶牛性控冻精产品中奶牛分离精子活力、奶牛分离精子总数、混合精子总数的检测。本发明简便地鉴别混合奶牛性控冻精产品，客观地检测混合性控冻精中分离精子各项质量指标。

主权项

一种混合奶牛性控冻精产品鉴定和检测方法，其特征在于：它包括混合奶牛性控冻精产品的鉴定方法和混合奶牛性控冻精产品的检测方法，其中：(1)混合奶牛性控冻精产品的鉴定方法，它包括以下步骤：1)奶牛性控冻精解冻：取1支规格为0.25ml细管在液氮中保存的奶牛性控冻精产品，迅速放入37℃温水浴中，精液从液氮罐取出到放入水中的时间不得超过10秒，待精液全部融化后将细管中精液转置于1.5ml离心管，放入37℃水浴锅温浴5分钟；2)混合奶牛性控冻精产品鉴定和确认：同时打开显微镜荧光和自然光，调节光的强度和焦点，达到通过显微镜滤色镜控制可以分别观察染色精子和未染色精子的状态，预先把载玻片和盖玻片放在37℃加热板上预热10分钟以上，用移液器从离心管取产品滴在准备好的载玻片上，压片后置于荧光显微镜下镜检，在此视场中，染色精子头部呈现蓝色荧光，未染色精子显示灰色；解冻后30分钟内，如能观察到未染色精子，确认该产品为混合奶牛性控冻精；3)奶牛分离精子以外的混合精子种类鉴定：奶牛分离精子以外的混合精子种类鉴定，其方法是：制备奶牛以外的可能用于精子混合使用动物品种的特异性DNA分子探针，与冻精产品的精子进行分子杂交处理，通过检测精子中有无精子显示特异性荧光杂交点来判别混合动物精子的种类；(2)混合奶牛性控冻精中奶牛分离精子活力、奶牛分离精子总数、混合精子总数检测方法，它包括以下步骤：1)奶牛分离精子活力检测，它包括以下步骤：用移液器从离心管取解冻后的混合奶牛性控冻精，滴在准备好的37℃加热载玻片上，压片后置于UV光源荧光显微镜下，选择压片均匀的样品区域观察，分别计数显示蓝色荧光的活精子数和死精子数，计算分离精子活力＝活分离精子数/活分离精子数与死分离精子数的和；2)奶牛分离精子总数和混合精子总数检测，它包括以下步骤：取部分解冻混合奶牛性控冻精样品，用福尔马林溶液固定稀释后滴在血球计数板上，在UV荧光显微镜下计数带有荧光的分离精子总数，并计算出每剂冻精中分离精子总数；再把显微镜调至自然光下，在自然光下计数总精子数，并计算出每剂冻精中总精子总数。