[发明专利]应用家蚕生物反应器制备人DNA聚合酶δ的方法

摘要

本发明涉用应用家蚕生物反应器制备人DNA聚合酶δ的方法。具体是将人DNA聚合酶δ的4个亚基分别构建到供体质粒上；在经过改造的大肠杆菌DH10Bac/BmNPV中和家蚕BmNPV杆状病毒DNA中Tn7转座子上发生转座，筛选出带有正确亚基的克隆，随后在家蚕BmN细胞中制备该4种亚基不同装配组合的重组病毒；感染宿主家蚕，在家蚕体内进行多亚基蛋白复合物的表达和装配；收集感染后的幼虫体液或整体匀浆，经分离纯化后获得目的产物。通过本发明可以高效、低成本、大规模地制备高比活、正确装配的DNA聚合酶多亚基蛋白复合物；能够被广泛地应用于某些重要疾病、特别是癌症疾病研究领域涉及DNA复制和损伤修复之基础研究。

主权项

应用家蚕生物反应器制备人DNA聚合酶δ的方法，包括：将组成人DNA聚合酶δ的4个亚基p125、p68、p50和p12的基因分别构建到杆状病毒供体质粒pFastBac上，分别得到重组质粒pFastBac‑p125、pFastBac‑p68、pFastBac‑p50和pFastBac‑p12，在经过改造的大肠杆菌DH10Bac/BmNPV中和家蚕BmNPV杆状病毒DNA于 Tn7转座子上发生转座，通过蓝白斑筛选出带有正确亚基的克隆，随后在家蚕BmN细胞中制备该4种亚基不同装配组合的重组病毒，用获得的重组病毒感染宿主昆虫家蚕，在宿主昆虫家蚕体内表达并包装成多亚基蛋白复合物的人DNA聚合酶δ经分离纯化后获得。