[发明专利]黄杆菌胞内酶提取和快速转化甜菊糖为甜茶甙的方法

摘要

本发明涉及一种利用细菌胞内酶提取后由甜菊糖制备甜茶甙的方法，属于生物转化领域。具体为将黄杆菌扩大培养后，收集菌体，经过细胞破碎，制备胞内β-葡萄糖苷酶，再将甜菊糖配成转化液，加入适量酶后，在适当的温度、pH、底物浓度及转化时间等条件下，将甜菊糖以高效快速的方式转化为甜茶甙。本发明提出了提取黄杆菌所产胞内β-葡萄糖苷酶制备甜茶甙的具体方法，操作简便，转化效率高，耗时短，浓度为1%的甜菊糖溶液经提取的粗液4h转化率可达56%，15h转化率达100%，酶经分离纯化后的转化率迅速提高，4h即可达到96%。

主权项

一种甜菊糖苷快速转化为甜茶甙的方法，其特征在于，包括下述步骤：（1）胞内酶提取：将黄杆菌活化，得到的活化菌液经4℃、12000 r/min离心12 min，弃去上清，收集菌体，将菌液采用高压细胞破碎仪或表面活性剂对菌体进行破碎，将破碎后的菌液于4℃、8000 r/min离心10 min，去除沉淀，上清用pH 4‑10的缓冲液定容至10 mL ~100 mL，即为初始胞内液；（2）转化：取初始胞内液加甜菊糖使其溶解制成甜菊糖转化液；对甜菊糖进行转化，获得甜茶甙。