[发明专利]恶臭假单胞菌KT2440高效的基因敲除方法无效
| 申请号： | 201010575202.0 | 申请日： | 2010-12-06 |
| 公开（公告）号： | CN102071185A | 公开（公告）日： | 2011-05-25 |
| 发明（设计）人： | 尚广东;杨运文;宋杰;高九彩 | 申请（专利权）人： | 南京师范大学 |
| 主分类号： | C12N15/09 | 分类号： | C12N15/09;C12N15/74;C12N15/54;C12R1/40 |
| 代理公司： | 南京知识律师事务所 32207 | 代理人： | 卢亚丽 |
| 地址： | 210046 江*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种通过重组工程手段对恶臭假单胞菌KT2440进行基因敲除的方法。具体方法是首先通过重叠－延伸聚合酶链式反应的手段扩增而获得左右两侧分别为待敲除的靶基因上下游各约500个碱基对的同源基因，中间为卡那霉素抗性基因的DNA片段。再将此DNA片段电转化至以终浓度为2mM间甲基苯甲酸诱导重组酶表达的恶臭假单胞菌KT2440电转化感受态细胞中，通过重组酶介导的同源片段之间的同源重组，卡那霉素抗性基因取代了靶基因而直接获得了靶基因敲除的突变株。本发明所述方法简便快捷，可成为在生物降解有机化合物等方面有着重要应用价值的环境微生物恶臭假单胞菌KT2440的遗传操作手段。 | ||
| 搜索关键词： | 恶臭 假单胞菌 kt2440 高效 基因 方法 | ||
【主权项】：
一种恶臭假单胞菌KT2440高效的基因敲除方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）通过重叠－延伸聚合酶链式反应的手段扩增而获得左右两侧分别为待敲除的靶基因上下游各500个碱基对的同源基因、中间为卡那霉素抗性基因的DNA片段；（2）将含重组酶基因的质粒pLS512转化至恶臭假单胞菌KT2440中，制成电转化感受态细胞；（3）将步骤（1）的得到的DNA片段电转化至以终浓度为2mM间甲基苯甲酸诱导重组酶表达的步骤（2）的恶臭假单胞菌KT2440电转化感受态细胞中，通过重组酶介导的同源片段之间的同源重组，卡那霉素抗性基因取代了靶基因而直接获得了靶基因敲除的突变株。
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