[发明专利]一种转基因水稻Bt蛋白cry1c的原核表达及纯化方法无效
| 申请号： | 201010578268.5 | 申请日： | 2010-12-08 |
| 公开（公告）号： | CN102094038A | 公开（公告）日： | 2011-06-15 |
| 发明（设计）人： | 唐雪明;赵凯;刘启文;杨奇;吴潇;朱宏;谭芙蓉;王金斌;陶世如;蒋玲曦;程凯;魏曼曼 | 申请（专利权）人： | 上海市农业科学院 |
| 主分类号： | C12N15/70 | 分类号： | C12N15/70;C12N1/21;C12P21/02;G01N33/68;C12R1/19 |
| 代理公司： | 上海开祺知识产权代理有限公司 31114 | 代理人： | 费开逵 |
| 地址： | 201106 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种转基因水稻Bt蛋白crylc的原核表达及纯化方法，包括以下步骤：1)根据华中农业大学测序好的crylc的基因，以及所要连接的载体PMD18-T的多克隆位点设计正、反向引物，进行PCR扩增和回收，并对PCR回收物进行DNA连接反应；2)大肠杆菌感受态细胞DH5α的制备和转化；3)表达质粒的重组构建、重组菌的诱导表达；4)表达蛋白Ni-NTA亲和层析纯化。采用本发明方法得到的目的蛋白纯度达到90％以上，同时利用本发明制备的高纯度转基因水稻Bt蛋白crylc可获得抗体，并可制作成胶体金免疫层析试纸条，以便在转基因植物检测中快速、准确的检测出Bt基因。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 转基因 水稻 bt 蛋白 cry1c 表达 纯化 方法 | ||
【主权项】：
一种转基因水稻Bt蛋白crylc的原核表达方法，包括以下步骤：1)根据华中农业大学测序好的crylc的基因，以及所要连接的载体PMD18‑T的多克隆位点设计正、反向引物，进行PCR扩增和回收，并对PCR回收物进行DNA连接反应；2)大肠杆菌感受态细胞的制备和转化；3)表达质粒的重组构建、重组菌的诱导表达。
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