[发明专利]鉴定奶牛早期胚胎性别的多重PCR方法

摘要

本发明提供了一种鉴别奶牛早期胚胎性别的多重PCR方法，即在PCR反应体系中引入牛Y染色体特异性引物和牛常染色体共有序列引物的组合，并优化反应体系组份配比和反应条件，建立一种快速、简便、准确和实用的奶牛早期胚胎性别鉴定技术。利用本发明的方法，只需一次PCR反应即可完成牛早期胚胎的性别鉴定，且操作简便快速，检测结果准确可靠。

主权项

一种鉴定奶牛早期胚胎性别的多重PCR方法，其特征在于其是将以下2对不同的引物引入下述PCR反应体系中，在下述反应条件下一次性扩增出不同的目标产物：牛Y染色体特异性引物序列：正向引物: 5’—CTGTCATTCTACTCTACTGTTTTCCCC—3’；反向引物: 5’—GATGTTATTATCTCTTTTCAGGTTTT—3’；内标引物序列：正向引物: 5’—TCGTCAGAAACCGCACACTG—3’；反向引物: 5’—TGGAAGCAAAGAACCCCGCT—3’；所述PCR反应体系为：总体积20μL，其中Mg2+浓度为1.5mmol/L，dNTP浓度为200μmol/L，Y‑染色体特异性引物浓度为150pmol/ L，内标引物浓度为50pmol/ L，模板量为1~10个胚胎细胞DNA，Taq 酶1.4U；所述反应条件为：95℃预变性5分钟；然后进行循环条件：95℃变性30秒，55℃退火30秒，72℃延伸30秒，35个循环；最后72℃延伸5分钟。