[发明专利]葡萄白藜芦醇-氧-甲基转移酶催化白藜芦醇生成紫檀芪的方法

摘要

本发明公开了一种葡萄白藜芦醇-氧-甲基转移酶催化白藜芦醇生成紫檀芪的方法，根据获得的中国野生葡萄华东葡萄ROMT基因EST序列，利用5’和3’RACE全长基因克隆技术克隆葡萄ROMT基因，该基因开放阅读框全长为1074bp；克隆的葡萄STS和ROMT能同时转入模式植物烟草中，利用烟草植物分析葡萄ROMT催化白藜芦醇生成紫檀芪的生物合成途径，为定向获得一个葡萄ROMT基因序列，此ROMT基因在转基因烟草中能催化白藜芦醇生成紫檀芪，为利用植物合成紫檀芪提供ROMT基因序列和方法，可为获得优质、抗病、保健作物提供依据。

主权项

葡萄白藜芦醇‑氧‑甲基转移酶催化白藜芦醇生成紫檀芪的方法，以中国葡萄属野生种华东葡萄高抗白粉白粉病株系“白河‑35‑1”为材料，用病叶压片法人工接种葡萄白粉菌，在接种诱导0，24，48，72，96，120和144小时提取总RNA，根据获得的中国野生葡萄华东葡萄ROMT基因EST序列，利用5’和3’RACE全长基因克隆技术克隆葡萄ROMT基因，该基因开放阅读框全长为1074bp；其特征在于：芪合成酶基因(STS)催化合成白藜芦醇，通过构建植物表达载体pWR306::STS做为检测阳性对照，构建pWR306::GUS做为阴性对照，此外，构建pWR306::ROMT；用农杆菌介导的叶盘转化法获得以下四种转基因烟草植株：pWR306::GUS转基因烟草植株；pWR306::STS转基因烟草植株；葡pWR306::ROMT转基因烟草植株；以及葡萄pWR306::STS和pWR306::ROMT共转基因烟草植株；利用Real‑time PCR法分析不同转基因烟草植株的基因表达差异，获得上述高表达GUS、STS、ROMT、以及STS和ROMT共表达转基因烟草植株，采用高效液相色谱分析这四种筛选出的高表达转基因烟草植株中白藜芦醇和紫檀芪的含量，确定ROMT基因功能。