[发明专利]葡萄芪合成酶基因病原菌诱导型启动子序列的应用

摘要

本发明涉及中国葡萄属野生种华东葡萄芪合成酶病原菌诱导型启动子序列的应用，在人工接种葡萄白粉菌后，应用半定量RT-PCR法分析中国葡萄属野生种华东葡萄株系白河-35-1芪合成酶基因表达模式，克隆芪合成酶基因的cDNA序列与gDNA序列，设计特异引物，进一步分离获得了芪合成酶基因病原菌诱导型启动子序列1772bp，通过瞬时转化分析确定该启动子具有病原菌诱导表达特性，该启动子与所克隆的芪合成酶基因cDNA与gDNA序列融合，在转化植物中受病原菌诱导表达调控，增强了目标植物对病原菌的抗性，从中国葡萄属野生种这一特异资源中分离克隆芪合成酶基因启动子，对于填补国内空白及进一步应用于植物抗病改良，具有重要的意义。

主权项

葡萄芪合成酶基因病原菌诱导型启动子序列的应用，是在人工接种葡萄白粉菌后，应用半定量RT‑PCR法分析中国葡萄属野生种华东葡萄株系白河‑35‑1叶片组织中芪合成酶基因表达模式，克隆芪合成酶基因的cDNA序列与gDNA序列，设计特异引物，进一步分离获得了芪合成酶基因病原菌诱导型启动子序列1772bp，其特征在于：采用染色体步移法分离克隆这种抗性葡萄种质中的芪合成酶基因上游启动子序列，对克隆的启动子序列进行顺式作用元件预测分析并构建启动子与报告基因及启动子与目标基因的融合载体，通过农杆菌介导的真空渗透法在感病葡萄中进行活性验证，及应用农杆菌介导的瞬时表达法在烟草中验证启动子活性，进一步将中国葡萄属野生种华东葡萄芪合成酶基因启动子分别与所克隆的中国葡萄属野生种华东葡萄芪合成酶基因cDNA与gDNA融合，构建PvpSTS::VpSTS cDNA与PvpSTS::VpSTS gDNA植物表达载体，应农杆菌瞬时表达法分析的抗病芪合成酶基因在烟草、蕃茄等植物中的病原菌诱导性表达。