[发明专利]一种铁皮石斛栽培种植菌根化生产方法

摘要

一种铁皮石斛栽培种植菌根化生产方法，其步骤如下：(1)采用固体或液体培养基培养菌根真菌，菌根真菌为菌根真菌LP2半知菌亚门镰刀菌属(Fusariumsp.)、菌根真菌LP3或两种的混合菌株半知菌亚门轮枝霉属(Verticilliumsp.)；(2)铁皮石斛组培苗培养；(3)配制营养液；(4)组培苗的水培炼苗；(5)铁皮石斛种植菌根化栽培。本发明的铁皮石斛栽培种植菌根化方法，能明显促进铁皮石斛幼苗生长，接菌栽培的铁皮石斛比对照植株生根数量增多，成活率高，植株的长度、长势更好，节间明显膨大，茎明显粗壮，鲜重和干重均有提高，接菌植株的抗逆性也明显增强。

主权项

一种铁皮石斛栽培种植菌根化生产方法，其特征在于步骤如下：(1)菌根真菌的培养将菌根真菌LP2、菌根真菌LP3或两种的混合菌株自低温保藏的斜面试管经菌种活化后，接于PDA平皿中，于23~28℃恒温培养10~15 d，在菌落边缘打孔成菌片，并以小块接入固体培养基或液体培养基；菌根真菌LP2为半知菌亚门镰刀菌属(Fusarium sp.)，菌根真菌LP3为半知菌亚门轮枝霉属(Verticillium sp.)；该两种菌种保藏于中国药用微生物菌种保藏管理中心，保藏编号分别为CPCC810233和CPCC421139；菌根真菌的固体培养基含有木质素、纤维素、碳、氮等营养素，由选自原料棉籽壳、木屑、碎玉米芯、阔叶树锯末、麦麸中的一种或几种组成，加水，水量为原料的150~200 wt%；高压灭菌后分别接入经培养所得菌根真菌LP1，每100 g培养基接2~3片菌片；真菌用试管、锥形瓶或培养瓶等器皿静置暗培养，待菌丝大部分或全部长满培养基时取出备用；菌根真菌的液体培养基含有葡萄糖、无机盐类成分和天然添加物；菌根真菌的液体培养基用水配制，其中葡萄糖18~22 g/L，KH2PO4 18~22 g/L，MgSO4 1.2~1.8 g/L，维生素B1 8~12 mg/L，天然物：麦麸25~35 g/L(煮汁)或马铃薯180~220 g/L(使用其浸出液)，培养基pH 值为5.6~6.5；高压灭菌后接入经培养所得菌根真菌LP1，每100 mL培养基接入1~2片菌片；真菌用三角瓶或其他容器通气暗培养，盛装量为50%，置于23~25℃振荡，转速100~120 rpm，培养20~30 d后收获；培养结束后得到液态菌根真菌，可直接使用或用匀浆机打碎培养产物备用；(2)铁皮石斛组培苗培养取生长良好的铁皮石斛植株上的萌发芽，取其茎段，消毒，接种于诱导培养基(1/2‑1)MS +BA 2.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L+3 wt%蔗糖+0.75 wt%琼脂；经诱导形成黄绿色的原球茎转接于增殖分化培养基(1/2‑1)MS+BA 1.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L +10 wt%香蕉汁+3 wt%蔗糖+0.75 wt%琼脂，2个月继代一次，得到有根有叶的小苗；再将有根有叶的小苗接种于培养基(1/2‑1)MS+10 wt%香蕉汁+NAA 2.0 mg/L+3 wt%蔗糖+0.75 wt%琼脂，使其生长；(3)配制营养液营养液由以下组分构成：硝酸钾1.0~1.2 wt‰，硫酸铵0.18~0.22 wt‰，硝酸铵0.08~0.12 wt‰，硫酸镁0.1~0.14 wt‰，磷酸二氢钾0.08~0.12 wt‰，氯化钙0.04~0.08 wt‰，硫酸锰0.01~0.03 wt‰，硫酸亚铁0.02~0.04 wt‰，硫酸锌0.004~0.006 wt‰，其余为水；(4)组培苗的水培炼苗将得到的铁皮石斛培养苗取出，用15~20℃的清水冲洗，沥去多余水分，栽种于架在营养液槽上的打好小孔的泡沫板的孔隙中，将营养液注入营养液槽中，使营养液浸没根系的40~60%，开动营养液槽的循环水泵，流速4~6 m/s；通风，风速0.3~0.5 m/s，进行种苗炼化；18~22 d后，铁皮石斛种苗根系发达，再生根增多，茎长长增粗，叶片变绿，变厚，即可以拔出进行大田移栽；(5)铁皮石斛种植菌根化栽培①铁皮石斛组培苗移栽将可以移栽的经过水培炼化的组培苗根部用清水清洗，清洗时注意尽量不要折断茎，损伤叶片；栽培基质采用砂砾岩粉末与土壤按重量比为1:1~2的混合物；移栽前，在每株苗的基部放置5~10 g粉碎的麦麸糖树叶(山毛榉科)，其上再放置1.5~2.5 mL前述步骤制备的液体菌根真菌或1.5~2.5 g前述步骤制备的固体菌根真菌，使铁皮石斛的根与菌接触；栽培时将根埋在基质中，茎上部露出基质表面，栽后要浇定根水，基质保持75%水分；将苗栽在苗盘或花盆中，栽时单株苗即可，不需要多株栽在一起，栽培距离为3~5 cm；②温度和湿度的控制将移栽有组培苗的苗盘或花盆移入薄膜大棚，铁皮石斛的生长温度控制在25~30℃，夏季采用75%的遮阳网覆盖，把塑料薄膜掀开，以利降温；冬天用30%的遮阳网覆盖，或者去掉遮阳网把塑料薄膜放下；铁皮石斛移栽初期要求湿度大，空气湿度保持在75~80%，基质保持湿润而不积水；③铁皮石斛的收获铁皮石斛栽后10~18个月可收获，收获时可连根取出，洗净栽培基质，去除因清洗沾在表面的水分。