[发明专利]一种杜衡组织培养的繁殖方法

摘要

本发明公开了一种杜衡组织培养的繁殖方法，该方法包括以下步骤：（1）选取外植体并进行消毒；（2）将处理后的外植体切割后，进行愈伤组织诱导培养；（3）将步骤（2）中所得愈伤组织进行继代增殖培养；（4）对继代增殖培养后的愈伤组织进行分化诱导；（5）将经分化处理后的愈伤组织进行侧芽诱导培养；（6）对步骤（5）中得到的无根苗进行生根诱导。采用该繁殖方法对杜衡进行组织培养，增殖率为50-72倍，且繁殖速度快。

主权项

一种杜衡组织培养的繁殖方法，其特征在于：包括如下步骤：（1）外植体的选取与消毒：选取当年生叶柄作为外植体，冲洗干净后，进行消毒；（2）愈伤组织的诱导：取步骤（1）中处理得到的外植体，切割为0.5‑1.0cm长的小段，将叶柄接种于诱导培养基中进行愈伤组织的诱导，培养温度为20‑26℃，首先在黑暗中培养20‑26小时，然后进行正常培养20‑25天；所述正常培养条件为：光照时间为10‑16小时/天，光照强度为1600‑2000Ix；所述诱导培养基为MS培养基并添加激素6‑BA、NAA和2,4‑D；所述诱导培养基中6‑BA浓度为1.0mg/L，NAA浓度为0.3mg/L，2,4‑D浓度为1.0mg/L；（3）愈伤组织的继代增殖：将步骤（2）中得到的杜衡愈伤组织切割后接入继代增殖培养基中进行继代培养25‑35天，培养温度为20‑26℃，光照时间为10‑16小时/天，光照强度为1600‑2000Ix；所述继代增殖培养基为MS培养基并添加激素6‑BA和NAA；所述继代增殖培养基中6‑BA浓度为5.0mg/L，NAA浓度为0.2mg/L；（4）愈伤组织的分化：取步骤（3）中继代增殖得到的杜衡愈伤组织，切割后接入分化培养基中培养15‑20天，培养温度为20‑26℃，光照时间为10‑16小时/天，光照强度为1600‑2000Ix；所述分化培养基为MS培养基并添加激素6‑BA、IBA和NAA；所述分化培养基中6‑BA浓度为3.0mg/L，IBA浓度为0.1mg/L，NAA浓度为0.3mg/L；（5）无菌苗的侧芽诱导：取步骤（4）中分化所得杜衡芽苗接入无激素MS培养基中培养15‑20天后，接入侧芽诱导培养基中培养25‑35天，培养温度为20‑26℃，光照时间为10‑16小时/天，光照强度为1600‑2000Ix；所述侧芽诱导培养基为MS培养基并添加激素6‑BA和IBA；所述侧芽诱导培养基中6‑BA浓度为3.0mg/L，IBA浓度为0.2mg/L；（6）根的诱导：将步骤（5）中经侧芽诱导后所得杜衡试管苗进行切割后，接入生根培养基中进行生根培养10‑15天，培养温度为20‑26℃，光照时间为10‑16小时/天，光照强度为1600‑2000Ix；所述切割后的试管苗每株均带有块茎；所述生根培养基为1/2 MS培养基并添加激素IBA；所述生根培养基中IBA浓度为3.0mg/L；上述诱导培养基、继代增殖培养基、分化培养基、无激素MS培养基、侧芽诱导培养基、生根培养基中均含有琼脂6.0‑7.0g/L、蔗糖25‑35g/L，且pH值为5.6‑5.8。