[发明专利]临床治疗用脐带间充质干细胞的制备和保存无效

专利信息
申请号: 201010585066.3 申请日: 2010-12-13
公开(公告)号: CN102154200A 公开(公告)日: 2011-08-17
发明(设计)人: 王福生;施明;徐若男 申请(专利权)人: 中国人民解放军第三○二医院
主分类号: C12N5/0775 分类号: C12N5/0775
代理公司: 北京华科联合专利事务所 11130 代理人: 王为
地址: 100039*** 国省代码: 北京;11
权利要求书: 查看更多 说明书: 查看更多
摘要: 发明涉及一种临床治疗用脐带间充质干细胞的制备和保存,其制备方法如下:用含0.2%庆大霉素、0.54%抗凝剂的生理盐水保存脐带,将脐带剪切至2-3cm,离心,悬浮,离心,直接贴壁植块培养,加入含15%胎牛血清、0.2%庆大霉素的α-MEM培养基培养,细胞融合后用含0.05%胰酶/0.2mMEDTA的消化液消化,按1∶3传代,传至4~5代,可获得大量间充质干细胞,加入冻存液(培养基∶胎牛血清∶DMSO=5∶4∶1)后,-70℃冰箱放置隔夜后置于液氮中保存,液氮冷冻温度为-196℃。
搜索关键词: 临床 治疗 脐带 间充质 干细胞 制备 保存
【主权项】:
一种以脐带为来源的间充质干细胞的制备方法,其特征在于,经过以下步骤:1).无菌条件下采集正常顺产或剖腹产者胎儿脐带,用含0.2%庆大霉素、0.54%枸橼酸钠抗凝剂的生理盐水保存脐带组织,2).将脐带置于含0.2%庆大霉素的生理盐水中,反复冲洗2‑3次,用无菌剪刀剪断脐静、动脉血管,剔除肉眼可见的血管组织和可能存在的血凝块,用剪刀将脐带剪切至2‑3cm大小,收集组织块置于50ml离心管内,高速离心,离心机转速为2000转/分钟,离心10分钟,弃掉上清,重新加入含0.2%庆大霉素的生理盐水,将沉淀的组织块充分振荡,使之松散,高速离心,离心机转速为2000转/分钟,离心10分钟,3).将步骤2所获的组织块用含15%胎牛血清、0.2%庆大霉素的α‑MEM培养基悬浮,充分振荡后高速离心,离心机转速为2000转/分钟,离心10分钟,4).将步骤3所获的脐带组织块平铺于塑料培养瓶内,各组织块间存留1‑2cm空隙,置于37℃5%CO2培养箱内60分钟,待组织块完全贴壁后,补加含15%胎牛血清、0.2%庆大霉素的α‑MEM培养基,5).每培养3‑5天进行半量换液处理,6).于培养第10‑12天左右在倒置显微镜下观察到组织块周围出现贴壁、梭型或多角型细胞时,将组织块全部吸出,补加含15%胎牛血清、0.2%庆大霉素的α‑MEM培养基,置于5%CO2培养箱中继续培养,成为形态较为均一的长梭型细胞,呈涡旋状生长,7).待涡旋状生长的细胞80%融合后,先用生理盐水反复冲洗培养瓶3次,用含0.05%胰酶/0.2mM EDTA的消化液消化细胞,按1∶3传代,培养条件更换为含10%胎牛血清、0.2%庆大霉素的α‑MEM培养基,8).经20‑25天扩增后,细胞传至4~5代,可获得大量间充质干细胞,9).将扩增后细胞加入培养基∶胎牛血清∶DMSO=5∶4∶1的冻存液,放入细胞冻存盒内,‑70℃冰箱放置隔夜后置于液氮中保存,置于液氮中保存即可。
下载完整专利技术内容需要扣除积分,VIP会员可以免费下载。

该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息,商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于中国人民解放军第三○二医院,未经中国人民解放军第三○二医院许可,擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作,请联系【客服

本文链接:http://www.vipzhuanli.com/patent/201010585066.3/,转载请声明来源钻瓜专利网。

×

专利文献下载

说明:

1、专利原文基于中国国家知识产权局专利说明书;

2、支持发明专利 、实用新型专利、外观设计专利(升级中);

3、专利数据每周两次同步更新,支持Adobe PDF格式;

4、内容包括专利技术的结构示意图流程工艺图技术构造图

5、已全新升级为极速版,下载速度显著提升!欢迎使用!

请您登陆后,进行下载,点击【登陆】 【注册】

关于我们 寻求报道 投稿须知 广告合作 版权声明 网站地图 友情链接 企业标识 联系我们

钻瓜专利网在线咨询

周一至周五 9:00-18:00

咨询在线客服咨询在线客服
tel code back_top