[发明专利]一种简易的卵母细胞体外成熟培养方法

摘要

本发明公开了一种简易的卵母细胞体外成熟培养方法，包括以下步骤：A1.卵母细胞的收集；A2.密闭气袋的制备及卵母细胞的体外成熟培养；A3.卵母细胞的孤雌激活及体外培养：在体外成熟培养22～24h挑选排出第一极体的成熟卵母细胞，第28h化学方法激活，然后在卵裂培养液中培养3d，囊胚培养液中培养4d，7～9d后观察统计囊胚率。应用自制的密闭气袋系统，只需普通的生化培养箱或水浴锅就能完成卵母细胞和胚胎的体外培养，减少了对于贵重仪器的依赖，降低了研究门槛。应用该简易密闭气袋进行体外卵母细胞培养，能够发育到囊胚，并且体外成熟率、卵裂率和囊胚率与正常CO2培养箱中培养相比略有提高。

主权项

一种简易的卵母细胞体外成熟培养方法，其特征在于，包括以下步骤：A1卵母细胞的收集：从屠宰场收集性成熟牛卵巢，抽吸法采集卵丘卵母细胞复合体，挑选胞质均匀并有3层以上卵丘细胞紧密包围的卵丘卵母细胞复合体用于体外成熟培养；A2密闭气袋的制备及卵母细胞的体外成熟培养：将培养有卵丘卵母细胞复合体的四孔板小心置入塑料袋，该塑料袋由避光耐热无毒塑料制成，宽约15cm、长约20cm，一端开口，初步封口，封口处留通气口，通过输气导管向袋内吹入人体呼出气体，输气导管带有0.22μm的微孔滤膜滤器，吹满后排出，如此反复进行3～4次，确保气袋内的空气完全被人体呼出的混合气体替代，然后将气袋完全封闭，置于38.5℃生化培养箱中培养22～24h，挑选排出第一极体的成熟卵，继续培养；A3卵母细胞的孤雌激活及体外培养：在体外成熟培养第28h，化学方法孤雌激活，然后在卵裂培养液中培养3d，囊胚培养液中培养4d，7～9d后观察统计囊胚率；所述孤雌激活、卵裂培养、囊胚培养均在密闭气袋、38.5℃生化培养箱中进行。