[发明专利]甾体类激素及多环芳烃高效生物荧光传感器及构建方法

摘要

一种甾体类激素及多环芳烃高效生物荧光传感器，属于分子生物学技术领域，其特征是：将质粒pK-3α-GFP3和p6分别转化进大肠杆菌中并分别制备成非细胞体系检测试剂，在重组质粒pK-3α-GFP3的顺势β-半乳糖苷酶(LacZ)启动子基因下游依次插入了3α-HSD启动子等调控序列468碱基对及GFP报告基因722碱基对；可以诱导p6质粒上3α-HSD的调控序列表达调控作用的蛋白，该蛋白可使质粒pK-3α-GFP3上的启动子启动进而表达出GFP蛋白，此时GFP的表达量严格受到诱导底物量的控制。有益效果是：针对现有检测系统的仪器要求严格、检测周期长、成本高、灵敏度低、检测物单一等弊端，本发明检测线性范围宽，技术操作简单，仪器要求不高，适宜推广应用于检测环境、食品中甾体类激素及多环芳烃污染物。

主权项

一种甾体类激素及多环芳烃高效生物荧光传感器，其特征是：将质粒pK‑3α‑GFP3和p6分别转化进大肠杆菌中并分别制备成非细胞体系检测试剂，建立了一种绿色荧光蛋白标记的生物荧光检测系统；在重组质粒pK‑3α‑GFP3的顺势β‑半乳糖苷酶启动子基因下游依次插入了3α‑HSD启动子等调控序列470碱基对及GFP报告基因717碱基对；重组质粒p6含有3α‑HSD全部调控基因，共5257碱基对；当环境中存在雌激素等底物时，可以诱导p6质粒上3α‑HSD的调控序列表达调控作用的蛋白，该蛋白可使质粒pK‑3α‑GFP3上的启动子启动进而表达出GFP蛋白，此时GFP的表达量严格受到诱导底物量的控制。