[发明专利]一种三倍体单体牡蛎培育方法

摘要

本发明涉及一种三倍体单体牡蛎培育方法，包括：亲贝获取精卵、三倍体牡蛎的生产、幼虫培育、采苗、单体牡蛎生产、倍性检测等步骤，将三倍体技术与单体牡蛎苗种培育技术相结合培育牡蛎新品种，同时可以规模化生产，使用该方法培育的单体牡蛎较现有牡蛎壳形规则、美观、壳深肉肥等明显的优点。

主权项

一种三倍体单体牡蛎培育方法，其步骤为：一.亲贝准备平均壳高为13.1cm的二倍体牡蛎系种贝300个和平均壳高为4.6cm的四倍体牡蛎30个，在室内经升温促熟培养；在牡蛎繁殖季节之前，使亲贝在室内进行升温促熟培养，经过一段时间的培育，亲贝性腺发育成熟，通过镜检卵子和精子发育情况决定是否解剖取卵，进行三倍体处理，加大投饵量，混合投喂新鲜的多品种饵料，满足亲贝性腺发育对营养物质的需要，为三倍体育苗提供成熟好的种贝，接着对卵子进行同步性发育处理，采用洁净的过滤海水浸泡的方法，通过20‑40分钟的浸泡培养，促进卵子生发泡的破裂，促进卵子的成熟；二.获取精卵通过解剖法获取精卵，将成熟的二倍体牡蛎系亲贝洗刷干净后，然后用高猛酸钾消毒10‑15分钟后，剖去右壳，露出软体部，在显微镜下鉴别雌雄，并检查精卵的成熟状况，挑出发育好的个体备用，雌雄严格分开放置，避免精子污染，将成熟的卵巢逐个剥离并破碎，分别用80目、250目的筛绢进行过滤，去除大的组织碎片，再用500目筛绢滤洗，去除组织液后在清洗干净的卵子中加入过滤海水，在23℃下备用，四倍体雄贝精子剥离后用300目筛绢过滤后，制成精液备用；三.三倍体牡蛎的生产利用成熟的二倍体卵子与四倍体精子受精后注入新鲜海水中孵化、培育，控制受精卵密度在3000‑5000万个/L；四.幼虫培育受精卵在23℃下，经22个小时发育至D型幼虫，进入幼虫培育期后，将幼虫培育密度控制在为6‑10个/mL，幼虫培育水温控制在25‑27℃之间，pH＝8.2左右，培育海水用浓度为5μmol/L的EDTA二钠螯合重金属离子，用0.5‑1.0μmol/L浓度的氯霉素预防病害，附苗时黑布遮光，将幼虫培养密度控制在：前期壳长200μm以内10‑15个/mL，中期壳长200‑280μm8‑10个/mL，后期壳长280μm以上4‑6个/mL，24小时连续充气，D形幼虫入池1‑2天内采用逐日加水，第3天用300目筛绢网箱换水，幼虫前期用微绿球藻和金藻投喂，后期增加扁藻和角毛藻，投饵量根据水中幼虫密度、幼虫胃饱满度和水中剩饵多少灵活掌握，以少量多次为好，每天一般2‑3次；五.采苗及单体牡蛎生产当幼虫壳长范围达到260‑340μm时，眼点出现，群体出现眼点时的壳长为280‑320μm，当眼点幼虫达到30％左右时，应及时投放附苗器，附着基为牡蛎壳串，每串100片，用60‑80丝聚乙烯绳将贝壳串在一起，经曝晒、浸泡、体积分数为20×10‑6的漂白粉消毒，清洗后使用，将贝壳串均匀地预先吊挂在培育池内，用80目筛绢网筛取网上眼点幼虫移入贝壳池中附苗，培育池上方用黑布遮盖，以保证贝壳正反面都能均匀地附上贝苗，当贝壳附苗量达到20个/片以上时，即可将幼虫浓集到另一附苗池继续附苗，稚贝附着后要加大换水量和投饵量，当稚贝长至0.8‑1.0mm左右时，即可出库下海暂养；六.倍性检测用压片法，将胚胎放入0.01％秋水仙素中处理1小时，处理时气温为18‑22℃，然后放入0.075mol/L的卡诺氏固定液中低渗30分钟，更换1次固定液，然后放入体积分数为50％冰醋酸中保存，40‑50℃玻片上滴片、风干，体积分数为4％的Gimsa染液染色10分钟，冲洗、凉干镜检。