[发明专利]从中药材圆锥铁线莲中分离纯化活性成分金色酰胺醇酯的方法

摘要

本发明公开了一种从药用植物圆锥铁线莲中分离纯化生物活性成分金色酰胺醇酯的方法，通过不同的中药提取方法得到圆锥铁线莲总提物，然后经过大孔树脂进行初步纯化，再经过两次硅胶柱色谱进行进一步分离得到金色酰胺醇酯粗品，金色酰胺醇酯粗品采用凝胶柱色谱纯化得到金色酰胺醇酯纯品。圆锥铁线莲具有多种生理活性，如抗肿瘤、治疗前列腺炎。本发明可以从圆锥铁线莲中分离得到一种酰胺类化合物金色酰胺醇酯，初步体外药理研究发现此化合物具有一定的抗肿瘤活性，另有研究报道此活性成分具有抗炎镇痛作用，该方法能够有效地分离得到金色酰胺醇酯单体，为进一步药理研究提供了基础。

主权项

一种从药用植物圆锥铁线莲中分离纯化生物活性成分金色酰胺醇酯的方法，其特征在于它的步骤如下：A：将新鲜采摘的毛茛科圆锥铁线莲药材全草或茎叶于室温下阴干，切段，加入2～50倍体积份浓度为1%～100%的乙醇，采用冷浸、渗漉、煎煮、超声、加热回流或微波进行提取，提取时间为0.1～5小时，过滤，药渣用上述方法再提取2～10次，合并提取液，回收乙醇，得到总提物浸膏；B：取步骤A中总提物浸膏用1～20倍体积份的水稀释，上装有非极性、弱极性或中极性中的任意一种大孔树脂分离柱进行纯化，大孔树脂用量为药材量的2～40倍重量份，分离柱的径高比为1：3～30，吸附流速为1～10BV/h；先用体积比为0.1%～50%的乙醇和水洗脱1～20BV，流速1～20BV/h；再用体积比为50%～100%的乙醇和水洗脱1～30BV，流速1～30BV/h，收集体积比为50%～100%的乙醇和水洗脱部分，回收乙醇，得到总提物纯化部分；C：取步骤B中总提物纯化部分，拌入1～10倍重量份100～200目硅胶，将溶剂挥干得到拌样硅胶；另取10～100倍重量份100～200目硅胶，干法装柱，径高比为1:3～30，将拌样硅胶加入柱顶，上加硅胶做保护层，以氯仿‑甲醇混合溶剂系统进行梯度洗脱，收集体积比为99:1～50:50的氯仿和甲醇洗脱液部分，薄层检识，薄层色谱条件为：正向硅胶G预制板；展开剂为99:1～80:20的氯仿‑甲醇，合并并回收洗脱溶剂，得到浓缩物；D：取步骤C中浓缩物，拌入1～10倍重量份100～200目硅胶，将溶剂挥干得到拌样硅胶；另取10～100倍重量份100～200目硅胶，干法装柱，径高比为1:3～30，将拌样硅胶加入柱顶，上加硅胶做保护层，以石油醚‑乙酸乙酯混合溶剂系统进行梯度洗脱，收集体积比为99:1～50:50的石油醚和乙酸乙酯洗脱液部分，薄层检识，薄层色谱条件为：正向硅胶G预制板；展开剂为99:1～80:20的氯仿‑甲醇，合并并回收洗脱溶剂，得到浓缩物；E：取步骤D中浓缩物，溶解于体积比为99:1～1:99的氯仿和甲醇混合溶剂中，上Sephadex LH‑20凝胶色谱柱进行纯化，溶解后浓缩物上样体积为凝胶柱保留体积的5%～20%，采用体积比为99:1～1:99的氯仿和甲醇混合溶剂进行等度洗脱，收集不同流份，薄层检识，薄层色谱条件为：正向硅胶G预制板；展开剂为99:1～80:20的氯仿‑甲醇，合并含有金色酰胺醇酯的流份，回收氯仿和甲醇，得到金色酰胺醇酯纯品。