[发明专利]高温环境下海水鱼类体表粘液功能蛋白检测方法

摘要

一种高温环境下海水鱼类体表粘液功能蛋白检测方法，首先收集鱼类体表粘液，其次粗提体表粘液蛋白；再利用双向电泳技术得到体表粘液蛋白图谱；之后再利用Imagemaster 2D Platinum 6.0图像分析软件进行图像分析，查找到差异显著的蛋白点；进行MALDI-TOF-TOF质谱分析，采用PMF技术和MASCOT、NCBI网站提供的检索工具进行鉴定，得到与高温胁迫相关的功能蛋白。本发明中采用简便的无菌塑料吸管收集粘液，快速、简便，并可快速分装，在-80℃下可保存一年以上；本发明中双向电泳等点聚焦电泳程序可将盐离子除净，得到的蛋白点清晰，圆滑，可以更加准确的对体表粘液功能蛋白定位定量。本发明适用于海水鱼类体表粘液蛋白在高温环境下的差异性表达、功能蛋白确定等检测技术。

主权项

一种高温环境下海水鱼类体表粘液功能蛋白检测方法，它的方法步骤是：收集粘液；提取体表粘液蛋白；对蛋白含量进行测定；双向电泳分离蛋白；蛋白图谱分析；差异蛋白点切胶回收；质谱分析，确定功能蛋白；其特征在于：所述的收集粘液：是使用简便的无菌塑料吸管收集粘液；所述的双向电泳分离蛋白：其等电聚焦程序为：S1 Stp：300V，2h；S2 Stp：1000V，2h；S3 Grd：8000V，2h；S4 Stp：8000V，2h；S5 Grd：10000V，3h；S6 Stp：10000，1.5h；S7 Stp：500V，12h；所述的质谱分析：进行MALDI‑TOF‑TOF质谱分析，采用PMF技术和MASCOT、NCBI网站提供的检索工具进行鉴定，确定功能蛋白——凝集素以及其与温度的相关性。