[发明专利]一种富硒北冬虫夏草的培育方法

摘要

一种富硒北冬虫夏草的培育方法，是采用有机硒酵母，避免无机亚硒酸、亚硒酸钠对菌丝生长的毒害，使培养基的含硒量达到50mg/L，从而培育出的富硒北冬虫夏草的含量达到35-50mg/L。本发明采用对北冬虫夏草生长抑制最少的有机硒酵母，使培养基的含硒量达到50mg/L，培育出的富硒北冬虫夏草含硒量达到35-50mg/kg，比添加无机硒的含硒量高2倍，产量高20％。

主权项

1.一种富硒北冬虫夏草的培育方法，其特征是包括如下步骤：(1)试管斜面富硒菌种的培养a、称取洗净去皮马铃薯200-克切成簿片，加入1000-毫升煮沸20-分钟，用纱布过滤，取滤液放入1000-毫升烧杯中，加入琼脂15-30克，蛋白陈10-20克，葡萄糖10-30克，磷酸二氢钾1-3克，含硒量2000mg/k g的硒酵母10-15克，水浴加热至琼脂完全溶化，加入热水补足1000-毫升，分装在试管内，每支试管装12-毫升，用棉塞塞紧，在手提高压灭菌锅-120℃保持灭菌40-分钟，出锅后趁热将试管摆成培养基离棉塞5-6c m的斜面，冷却后斜面成固体状备用；b、菌种分离选生长粗壮、色泽桔红的野生北冬虫夏草子实体或人工培育的北冬虫夏草子实体，放入烧杯中，再用-75％酒精灭菌-1分钟，去掉酒精，用灭菌水浸没清洗3次，去酒精，去掉清洗水备用；c、接斜面菌种在接种箱中将灭菌清洗过的北冬虫夏草子实体用接种刀横切成-2mm簿片，接一片入试管斜面培养基中间处，切口向上，塞好棉塞，在-20℃恒温箱中培养-15天，移出恒温箱，保持20-22℃在室内散射光照-3天让菌丝转色，选出菌丝生长平整，色泽桔红，无杂菌的富硒北冬虫夏草母种，用黑色纸包好放入-5℃恒温箱内保存备用。(2)富硒北冬虫夏草液体菌种的培养称取葡萄糖-20克，蛋白陈-10克，磷酸二氢钾-1克，硫酸镁-1克，硒酵母-15克，放入-1000毫升水中煮沸-10分钟，冷却至室温后用多层纱布过滤，将清液装入-500毫升盐水瓶中，每瓶装-250毫升，用棉塞塞紧，放入手提高压灭菌锅，在-120℃保持灭菌-40分钟，冷却至室温后连同母种放入接种箱中，按无菌操作，先将斜面母表面的菌丝用接种刀轻轻刮掉，切取菌块的-0.5平方厘米，去掉培养基，将菌块放入盐水瓶，菌丝面向上，浮在液面上，塞好棉塞，放入暗房，控制温度20-22℃静置培养-3天，观察菌块表面及边沿长出白色菌丝，营养液澄明无混浊，移放在摇床培养-5天即成富硒北冬虫夏草液体菌种；(3)富硒北冬虫夏草的培育a、固体培养基营养液的配制称取葡萄糖-20克，蛋白陈-10克，磷酸二氢钾-1克，硫酸镁-1克，维生素B₁-100毫克，硒蛋白35克，放入-1000毫升70-80℃热水中，搅拌至物料溶解；b、固体培养基的配制在-600毫升大口玻璃瓶中，每瓶装入大米-40克，营养液-60毫升，用聚丙烯簿膜封瓶口，放入高压灭锅内，在-120℃温度下保持灭菌-60分钟，待缓慢排放压力后出锅，冷却待用；c、接种在超净台上用带喷嘴的接种枪，每瓶接入富硒北冬虫夏草液体菌种-3毫升，均匀喷在培养基面上，接种后移入无光培养室，控制温度20-22℃发菌；d、富硒北冬虫夏草的培育经过8-10天避光发菌，培养基表面全部长满白色菌丝，即可见光转色，在散射光照下3-5天，菌丝转为桔黄至桔红色，控制温度20-22℃，相对湿度80-85％，-10天出现米粒状子实体原基并长出子实体，用2-3毫升粗的不锈钢针在瓶口簿膜上扎孔换气及吸收空间水份，控制湿度-90℃，再经-30天的生长，子实体长到4-8厘米，形成孢子时子实体成熟即可采收，及时干燥至水份不超过-5％，放入塑料袋密封包装。