[发明专利]利用体外蛋白合成体系将非天然氨基酸引入蛋白的单装载体系有效
| 申请号： | 201080011441.1 | 申请日： | 2010-01-11 |
| 公开（公告）号： | CN102348807A | 公开（公告）日： | 2012-02-08 |
| 发明（设计）人： | 阿列克谢·M·沃洛申;詹姆士·F·扎瓦达;丹尼尔·戈德;克里斯托弗·詹姆士·默里;詹姆士·爱德华·罗泽拉;纳森·与特尔;殷钢 | 申请（专利权）人： | 苏特罗生物制药公司 |
| 主分类号： | C12P21/04 | 分类号： | C12P21/04;C12P19/34 |
| 代理公司： | 北京英赛嘉华知识产权代理有限责任公司 11204 | 代理人： | 王达佐;洪欣 |
| 地址： | 美国加利*** | 国省代码： | 美国;US |
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| 摘要： | 本发明提供了利用无细胞合成体系将非天然氨基酸并入蛋白的预选位置的新方法。该方法涉及使用由遗传密码编码的非正交天然同功有义tRNA。这类方法允许通过使用有义密码子将多个非天然氨基酸并入，而不必依赖正交tRNA-合成酶对。 | ||
| 搜索关键词： | 利用 体外 蛋白 合成 体系 天然 氨基酸 引入 装载 | ||
【主权项】：
利用无细胞合成体系，将非天然氨基酸引入多肽的预选位置的体外方法，所述方法包括：a)获得包含简并有义密码子的核酸模板，其中第一有义密码子和第二有义密码子对应于相同的天然氨基酸，但它们各自的核苷酸序列不同；b)产生细胞裂解物；c)去除氨酰化所述天然氨基酸的天然氨酰tRNA合成酶；c)向所述裂解物添加第一外源氨酰tRNA合成酶，所述第一外源氨酰tRNA合成酶选择性地氨酰化第一同功有义tRNA，所述第一同功有义tRNA对应于所述核酸模板的第一有义密码子；d)向含有装载反应混合物的反应容器添加氨酰化催化试剂，所述装载反应混合物包含非天然氨基酸和第二同功有义tRNA，所述第二同功有义tRNA对应于所述核酸模板的第二有义密码子；e)用所述非天然氨基酸氨酰化所述第二同功有义tRNA，从而产生tRNA：非天然氨基酸装载部分；f)在适合从所述模板产生蛋白的条件下，使所述细胞裂解物与以下混合：1)所述tRNA：非天然氨基酸装载部分，和2)包含所述第一和第二有义密码子的核酸模板；以及g)允许反应进行，从而产生在对应于所述核酸模板的第二有义密码子的那些位置处携带非天然氨基酸的多肽。
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