[发明专利]细菌(柔膜细菌)污染的改良检测

摘要

本发明提供了通过抑制非特异性扩增产物改良的基于PCR的靶序列扩增。改良涉及使用被最佳化以在第一种生物的基因组DNA的背景中扩增污染物的核酸的引物对。当对怀疑包含污染物的来自第二种生物的DNA实施相同的基于PCR的扩增反应时，当第一种生物的基因组DNA的量存在于扩增反应中时，污染物的检测灵敏度和特异性增强。

主权项

一种用于测定具有生物学材料的样品中细菌污染物的存在或不存在的改良方法，所述方法包括步骤(a)处理所述样品且纯化来自所述经处理的样品的核酸，随后为(b)形成用于基于PCR的扩增反应的组合物(反应混合物)，所述组合物包括‑根据SEQ ID NO：1的第一种引物、‑根据SEQ ID NO：2的第二种引物，和‑步骤(a)的所述纯化核酸或其测量的部分作为模板；随后为(c)用步骤(b)的所述组合物进行聚合酶链式反应(PCR)；随后为(d)检测扩增的靶序列的存在或不存在，其中所述扩增的靶序列的存在指示所述样品中所述细菌污染物的存在，并且所述扩增的靶序列的不存在指示所述样品中所述细菌污染物的不存在；所述改良的特征在于相对于所述样品的体积，将来自CHO细胞的预定量的DNA加入(i)所述样品、或(ii)步骤(a)的所述经处理的样品、或(iii)在步骤(a)中获得的所述纯化核酸、或(iv)步骤(b)的所述组合物中，由此所加入的来自CHO细胞的DNA减少步骤(d)中的非特异性扩增。