[发明专利]用于在丝状真菌中改善苹果酸产生的方法

摘要

本发明涉及产生C4二羧酸(例如苹果酸)的方法，包括：(a)培养丝状真菌宿主细胞，所述宿主细胞包含选自下组的多核苷酸：编码C4二羧酸转运蛋白的异源第一多核苷酸，编码苹果酸脱氢酶的异源第二多核苷酸，和编码丙酮酸羧化酶的异源第三多核苷酸；其中在相同条件下培养时，所述丝状真菌宿主细胞与不具有异源多核苷酸的丝状真菌宿主细胞相比，能够分泌增加水平的C4二羧酸；和(b)回收所述C4二羧酸。本发明还涉及用于增加C4二羧酸产生的方法，丝状真菌宿主细胞和苹果酸脱氢酶变体。

主权项

一种丝状真菌宿主细胞，其包含编码C4二羧酸转运蛋白的异源第一多核苷酸，其中所述C4二羧酸转运蛋白选自下组：(a)C4二羧酸转运蛋白，其包含氨基酸序列，所述氨基酸序列与SEQ ID NO：8，SEQ ID NO：34，或SEQ ID NO：36具有至少60％序列同一性；(b)C4二羧酸转运蛋白，其由多核苷酸编码，所述多核苷酸在低严格条件下与SEQ ID NO：7，SEQ ID NO：33，SEQ ID NO：35，SEQ ID NO：37，或其全长互补链杂交；(c)C4二羧酸转运蛋白，其由多核苷酸编码，所述多核苷酸包含核苷酸序列，所述核苷酸序列与SEQ ID NO：7，SEQ ID NO：33，SEQ ID NO：35，或SEQ ID NO：37具有至少60％的序列同一性；(d)C4二羧酸转运蛋白变体，其包含SEQ ID NO：8，SEQ ID NO：34，或SEQ ID NO：36的成熟多肽的一个或多个(几个)氨基酸的取代、缺失和/或插入；或(e)(a)，(b)，(c)或(d)的C4二羧酸转运蛋白的具有C4二羧酸转运蛋白活性的片段；而且其中在相同条件下培养时，所述丝状真菌宿主细胞与不具有编码C4二羧酸转运蛋白的异源第一多核苷酸的丝状真菌宿主细胞相比，能够分泌增加水平的C4二羧酸。