[发明专利]制备间充质干细胞、组合物和其试剂盒的方法有效
| 申请号： | 201080053627.3 | 申请日： | 2010-11-25 |
| 公开（公告）号： | CN102639694A | 公开（公告）日： | 2012-08-15 |
| 发明（设计）人： | 拉克希·帕尔;帕万·库马尔·古普塔;普拉桑纳·库马尔·肯布鲁;乔蒂·普拉桑纳;萨蒂什·托特;拉维拉加·尼拉瓦尔·塞塔拉姆;乌门什·拜库吉·戈利塔德卡;阿尼什·森·马宗达 | 申请（专利权）人： | 斯蒂姆普优提克斯个人研究有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/0775 | 分类号： | C12N5/0775;C12N5/071;C12N5/074 |
| 代理公司： | 北京康信知识产权代理有限责任公司 11240 | 代理人： | 李丙林;宋春妮 |
| 地址： | 印度卡*** | 国省代码： | 印度;IN |
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| 摘要： | 本发明公开了一种分离、汇集且进一步培养用于临床应用的间充质干细胞（MSC）的方法。本发明也公开了建立主细胞库（Master Cell bank）的方法，然后从工作细胞库（Working Cell Bank）制备最终治疗组合物供临床应用，该最终治疗组合物称为研究产品/研究医疗产品，其包含源于骨髓的异源MSC。 | ||
| 搜索关键词： | 制备 间充质 干细胞 组合 试剂盒 方法 | ||
【主权项】：
一种制备包括间充质干细胞、胎牛血清（FBS）和二甲基亚砜（DMSO）的主细胞库组合物的方法，所述方法包括以下步骤：a.获取骨髓细胞并在培养基中稀释骨髓细胞，将经稀释的细胞离心以获得第一团块，并用所述培养基再次稀释所述第一团块；b.向再次稀释的团块中加入浓度梯度溶液并离心以在界面处获得阻挡层；c.向所述阻挡层中再次加入等体积的所述培养基并离心以获得第二团块，然后使所述第二团块悬浮于所述培养基中并孵育以达到约80%至85%的汇合率；d.将所述培养基吸出并用杜氏磷酸盐缓冲液（DPBS）清洗汇合细胞，然后用0.25%的胰酶处理细胞并再次孵育经处理的细胞；e.用中和培养基中和经再次孵育的细胞并再次离心所述细胞以获得第三团块，然后将所述第三团块悬浮于培养基中，并用包含约85%至95%的FBS和约5%至15%的DMSO的冷冻培养基将所述细胞冷冻；以及f.将经冷冻的所述细胞用胰酶消化并将经胰酶消化的细胞再次悬浮于所述冷冻培养基中以获得主细胞库组合物。
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