[发明专利]用于神经元特异性的体内连续DOPA合成的新型病毒载体构建体

摘要

本发明涉及包含编码两种多肽的序列的单载体表达系统，所述两种多肽诸如酪氨酸羟化酶(TH)和GTP-环化水解酶1(GCH1)。这两种多肽可应当优选地以3∶1至15∶1之间，诸如3∶1至7∶1之间的比率表达。本发明可用于治疗儿茶酚胺缺乏症，诸如多巴胺缺乏症包括但不限于帕金森氏病。此外，本发明提供了递送载体构建体的方法，以便将儿茶酚胺产生增加限制在有需要的细胞中。

主权项

一种单载体表达系统，包含a)第一和第二表达盒，所述第一表达盒包含核苷酸序列，所述核苷酸序列包含与第一核苷酸序列可操作地连接的第一启动子序列，所述第一核苷酸序列编码GTP‑环化水解酶1(GCH1)多肽或其生物学活性片段或变异体，并且其中所述第二表达盒包含核苷酸序列，所述核苷酸序列包含与第二核苷酸序列可操作地连接的第二启动子序列，所述第二核苷酸序列编码酪氨酸羟化酶(TH)多肽或其生物学活性片段或变异体，条件是所述载体不包含编码芳香族氨基酸脱羧酶(AADC)多肽的核苷酸序列，或b)第一和第二表达盒，所述第一表达盒包含核苷酸序列，所述核苷酸序列包含与第一核苷酸序列可操作地连接的第一启动子序列，所述第一核苷酸序列编码GTP‑环化水解酶1(GCH1)多肽或其生物学活性片段或变异体，并且其中所述第二表达盒包含核苷酸序列，所述核苷酸序列包含与第二核苷酸序列可操作地连接的第二启动子序列，所述第二核苷酸序列编码酪氨酸羟化酶(TH)多肽或其生物学活性片段或变异体，其中所述载体是腺相关病毒载体(AAV)，或c)表达盒，所述表达盒包含启动子、第一核苷酸序列、翻译起始核苷酸序列诸如内部核糖体进入位点(IRES)和第二核苷酸序列，其中所述启动子与所述第一核苷酸序列可操作地连接，并且其中所述翻译起始核苷酸序列连接所述第一和所述第二核苷酸序列，其中所述第一核苷酸序列编码GTP‑环化水解酶1(GCH1)多肽或其生物学活性片段或变异体，并且其中所述第二核苷酸序列编码酪氨酸羟化酶(TH)多肽或其生物学活性片段或变异体，或d)表达盒，所述表达盒包含第一核苷酸序列、翻译起始核苷酸序列诸如内部核糖体进入位点(IRES)和第二核苷酸序列，其中所述翻译起始核苷酸序列连接所述第一和所述第二核苷酸序列，并且其中包含所述第一核苷酸序列——所述第一核苷酸序列连接至所述翻译起始核苷酸序列，所述翻译起始核苷酸序列连接至所述第二核苷酸序列——的序列的侧翼是5’和3’末端重复序列，并 且其中所述第一核苷酸序列编码GTP‑环化水解酶1(GCH1)多肽或其生物学活性片段或变异体，并且其中所述第二核苷酸序列编码酪氨酸羟化酶(TH)多肽或其生物学活性片段或变异体，其中所述末端重复序列中的至少一个包含能够指导可操作地连接的多肽表达的序列。