[发明专利]一种制备脱氧核糖核苷三磷酸的新方法

摘要

本发明涉及人工合成DNA必备前体原料的制备方法。采用化学合成-酶促合成的全新工艺，以dNMP为原料加正磷酸三丁胺进行化学反应可得到dNDP粗品，dNDP的收率为70％-90％。dNDP中加入PEP-Na，以ATP-Na作为催化剂，再加入丙酮酸激酶和金属离子进行酶促反应，得到dNDP和dNTP的混合物，dNTP的含量在60％-80％之间，得到的混合物经层析分离和纯化，可得到纯度为97％-99％的dNTP，本发明不仅使dNTP的合成变的简单，且不受反应量的限制，可工业化生产，且对环境的污染极小。

主权项

一种制备脱氧核糖核苷三磷酸的新方法，本发明是通过以下过程和方法实现的：(1)化学合成：以dNMP为原料，其水溶液用盐酸调pH值为4‑6，加入5‑10倍物质量的DCC、4‑8倍物质量的正磷酸三丁胺，以2倍体积的乙醇作为溶剂，80℃搅拌反应10小时，冰浴100min后过滤除不溶物，所得液体在40℃条件下旋转蒸发除乙醇，得到的混合物加入50‑60倍体积的H2O溶解，用氢氧化钠调pH为中性，所得混合物为dNMP、dNDP和磷酸盐的水溶液，其中含dNDP70％‑90％，经阴离子树脂柱层析分离后得到纯净的dNDP。(2)酶促反应：dNDP水溶液中加入4‑6倍物质量的PEP‑Na，用氢氧化钠溶液调节pH为6‑8，以ATP‑Na为催化剂，再加入丙酮酸激酶和金属离子，在50‑60℃条件下进行酶促反应48‑72小时，即可得到dNDP和dNTP的混合物，dNTP的含量在60％‑80％之间，将该混合物层析分离可得到纯度为97％‑99％的dNTP。