[发明专利]壳寡糖递送系统组装的结核粘膜基因疫苗及其制备和应用

摘要

一种壳寡糖递送系统组装的结核粘膜基因疫苗，由壳寡糖与结核抗原编码质粒共聚交联复合而成，结核抗原编码质粒中插入有结核分枝杆菌H37Rv株来源的热休克蛋白HSP65的全长基因，HSP65全长基因中插入来自结核杆菌分枝杆菌H37Rv株来源的抗原中的4个T细胞表位基因ESAT-6189-228、Ag85A369-405、CFP10162-207和Ag85B420-459。本发明还公开了这种结核粘膜基因疫苗的制备方法和应用。本发明的结核黏膜基因疫苗可诱导结核特异性血清抗体和全身Th1型免疫应答；能诱导肺粘膜局部增强的结核特异性分泌型SIgA和IFNγ+Th1应答，效果显著优于裸露的pECANS基因疫苗。

主权项

一种壳寡糖递送系统组装的结核粘膜基因疫苗，其特征在于：由壳寡糖与结核抗原编码质粒共聚交联复合而成，所述的结核抗原编码质粒由一个载体构成，在所述的载体中插入有结核分枝杆菌H37Rv株来源的热休克蛋白HSP65的全长基因，所述的结核分枝杆菌H37Rv株来源的热休克蛋白HSP65的全长基因中嵌合有来自结核杆菌抗原的4个T细胞表位多肽基因，所述的4个T细胞表位分别是结核分枝杆菌H37Rv株来源的ESAT‑6蛋白的189～228位基因，结核分枝杆菌H37Rv株来源的Ag85A蛋白的369～405位基因，结核分枝杆菌H37Rv株来源的CFP‑10蛋白的162～207位基因，结核分枝杆菌H37Rv株来源的Ag85B蛋白的420～459位基因，所述的结核分枝杆菌H37Rv株来源的的热休克蛋白HSP65基因的DNA序列如SEQ ID NO：2所示，所述的结核分枝杆菌H37Rv株来源的ESAT‑6蛋白的189～228位基因的DNA序列如SEQ ID NO：4所示，所述的结核分枝杆菌H37Rv株来源的Ag85A蛋白的369～405位基因的DNA序列如SEQ ID NO：6所示，所述的结核分枝杆菌H37Rv株来源的CFP‑10蛋白的162～207位基因的DNA序列如SEQ ID NO：8所示，所述的结核分枝杆菌H37Rv株来源的Ag85B蛋白的420～459位基因的DNA序列如SEQ ID NO：10所示。在结核分枝杆菌H37Rv株来源的的热休克蛋白HSP65全长基因中的第438位碱基后插入结核分枝杆菌H37Rv株来源的ESAT‑6蛋白的189～228位基因、第486位碱基后插入结核分枝杆菌H37Rv株来源的Ag85A蛋白的369～405位基因、第1185位碱基后插入结核分枝杆菌H37Rv株来源的CFP‑10蛋白的162～207位基因和结核分枝杆菌H37Rv株来源的Ag85B蛋白的420～459位基因，所述的CFP‑10蛋白 的162～207位基因和所述的Ag85B蛋白的420～459位基因之间以gccgcctac基因序列相连接。嵌合了结核分枝杆菌H37Rv株来源的4个T细胞表位基因的结核分枝杆菌H37Rv株来源的热休克蛋白HSP65的全长基因所构成的外源目的基因的DNA序列如SEQ ID NO：12所示。