[发明专利]一种海洋贝类D形幼虫的石蜡切片方法

摘要

本发明涉及一种海洋贝类D形幼虫的石蜡切片方法，包括：(1)将Bouin氏液加入存有海洋贝类D形幼虫样品的容器中，移入质量百分比浓度70％酒精中，得到固定后的海洋贝类D形幼虫；(2)将固定后的海洋贝类D形幼虫包裹，放置于样品包埋盒中，包埋盒置于脱水机或染色缸中；经过脱水步骤，透明步骤和浸蜡步骤；(3)包埋和样品定位；(4)切片和烘干；(5)采用苏木精-伊红复染方法染色。本方法方法简单易行，处理时间短，并有过渡步骤，使幼虫的各组织逐渐完全地被试剂浸入，完好地保存幼虫组织的原有形态及结构，为贝类早期胚胎及幼虫发育研究提供了切实有效的技术手段。

主权项

一种海洋贝类D形幼虫的石蜡切片方法，包括：(1)将Bouin氏液加入存有海洋贝类D形幼虫样品的容器中，充分摇匀，待样品沉降后，更换Bouin氏液，1‑2小时更换一次，直至气泡消失，Bouin氏液固定12小时后，移入质量百分比浓度70％酒精中，更换酒精直至完全洗去样品中的黄色，得到固定后的海洋贝类D形幼虫；其中Bouin氏液与样品的体积比为10∶1～50∶1；酒精与样品的体积比为10∶1～50∶1；(2)用500目或300目筛绢将上述固定后的海洋贝类D形幼虫包裹，放置于包埋盒中，包埋盒经过脱水步骤，透明步骤和浸蜡步骤；(3)将经过步骤(2)处理后的筛绢打开，放置在温度为50‑60℃的铁质台上，将操作区周围的环境温度调至40‑45℃，用吸管吸取融化后温度为65～70℃的石蜡，将样品冲散后吸入管内，将吸管内的样品注入盛满融化石蜡的铁质包埋盒底部，待样品沉降后在体式显微镜下用解剖针将样品调整到最佳位置，室温冷却包埋块；(4)将上述包埋块切片，切片厚度5～7μm，蜡带用40℃‑50℃恒温水浴展片，贴于事先涂有粘片剂的载玻片上，然后烘烤；(5)染色采用苏木精‑伊红复染方法，步骤如下：二甲苯脱蜡5分钟3次、体积比1∶1的无水乙醇/二甲苯3分钟、95％乙醇3分钟、80％乙醇3分钟、70％乙醇3分钟、50％乙醇3分钟、30％乙醇3分钟、蒸馏水3分钟、苏木精染液2～3分钟、自来水冲洗10～15分钟、30％酸性乙醇分色、自来水冲洗10～15分钟复蓝，至细胞核呈蓝色或者在碱性自来水中浸洗3分钟后流水浸洗3分钟、30％乙醇3分钟、50％乙醇3分钟、70％乙醇3分钟、80％乙醇3分钟、95％乙醇3分钟、伊红染液45秒～1分钟、95％乙醇分色、无水乙醇3分钟2次、体积比1∶1的无水乙醇/二甲苯3分钟和二甲苯5分钟2次；之后用中性树胶封片，烘烤即得；其中溶液的浓度均为质量百分比浓度。