[发明专利]同步定量测定蔬菜中总叶酸及其衍生物含量的方法

摘要

本发明公开了一种同步定量测定蔬菜中总叶酸及其衍生物含量的方法，依次包括以下步骤：1）、提取蔬菜中叶酸；2）、在步骤1）所得的蔬菜叶酸提取物中加入老鼠血清轭合酶孵育，离心后，得蔬菜叶酸去轭提取物；3）、固相萃取纯化蔬菜叶酸去轭提取物；4）、色谱柱分离蔬菜中包括四氢叶酸，5-甲基–四氢叶酸，5-甲酰–四氢叶酸和叶酸在内的四种叶酸衍生物；5）、叶酸定量测定。采用本发明的方法可以同步测定蔬菜中总叶酸及不同叶酸衍生物的含量。

主权项

同步定量测定蔬菜中总叶酸及其衍生物含量的方法，其特征是依次包括以下步骤： 1）、提取蔬菜中叶酸：利用0.1 M磷酸缓冲液煮沸提取蔬菜中的叶酸，冷却并离心后，得上清液；所述上清液为蔬菜叶酸提取物；2）、添加叶酸轭合酶：     在步骤1）所得的蔬菜叶酸提取物中加入老鼠血清轭合酶，于35~39°C孵育，然后煮沸从而终止老鼠血清轭合酶的活性；离心后取上清液，所述上清液为蔬菜叶酸去轭提取物；3）、固相萃取纯化蔬菜叶酸去轭提取物：强阴离子交换物质的固相萃取柱活化后，加入步骤2）所得的蔬菜叶酸去轭提取物，经去离子水淋洗，最后用0.1M乙酸钠缓冲液进行洗脱；从0.1M乙酸钠缓冲液洗脱开始，收集含有叶酸衍生物的纯化液；4）、色谱柱分离蔬菜中包括四氢叶酸，5‑甲基–四氢叶酸，5‑甲酰–四氢叶酸和叶酸在内的四种叶酸衍生物：采用250 × 4.6 mm 、粒径为5 mm的 Zorbax SB色谱柱作为分离柱、乙腈‑磷酸缓冲液作为流动进行相梯度洗脱（梯度洗脱程序为0min，6∶94；5min，6∶94；20 min， 25∶75； 2min，25∶75；1 min，6∶94；14 min，6∶94），流速：0.4 mL/min，柱温度23 °C；含有叶酸衍生物的纯化液的进样量：20 μL；5）、叶酸定量测定。