[发明专利]重组人源无标签SDF-1在大肠杆菌中的表达及纯化方法无效
| 申请号： | 201110006607.7 | 申请日： | 2011-01-13 |
| 公开（公告）号： | CN102154304A | 公开（公告）日： | 2011-08-17 |
| 发明（设计）人： | 柴笑梅;朱月珍;杨宣武;江永海;吴咪佳 | 申请（专利权）人： | 江苏普罗赛生物技术有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/12 | 分类号： | C12N15/12;C12N15/70;C07K14/52;C07K1/18;C07K1/16 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 213164 江苏省常州市武进区*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明涉及在大肠杆菌中表达、纯化得到高质量人源无标签SDF-1的方法。本方法通过表达载体的构建、蛋白的诱导表达、包涵体的制备、乙酸透析复性、离子交换纯化以及分子筛纯化等5个步骤进行纯化、复性而获得高质量的无标签SDF-1蛋白。本发明提供的工艺方案在实际生产过程中的生产周期大幅缩短，具有生产成本低、产品得率高、产品品质优异的特点。图为SDS-PAGE分析纯化所得蛋白(第一列为蛋白质分子量标准，第二列为非还原条件下无标签的SDF-1beta，第三列为空白，第四列为还原条件下无标签的SDF-1bcta) | ||
| 搜索关键词： | 重组 人源无 标签 sdf 大肠杆菌 中的 表达 纯化 方法 | ||
【主权项】：
一种重组人源无标签SDF‑1在大肠杆菌中的表达及纯化方法，其特征在于该方法通过如下步骤实现重组人源无标签SDF‑1在大肠杆菌中的表达及纯化：(1)将PCR合成的无标签SDF‑1基因构建于表达载体pET28a，然后通过菌液来培养pET28a‑SDF‑1质粒，再经过IPTG诱导表达目的蛋白；(2)通过超声方法来破碎菌体，在沉淀物中得到目的蛋白，经洗涤沉淀后得到包涵体，再利用盐酸胍对包涵体进行变性；(3)通过乙酸透析，对包涵体进行复性；(4)通过强阳离子交换树脂(SP‑bestraose)进行第一步纯化；(5)通过Akta Purifier分子筛进行第二步纯化，得到高质量的人源无标签SDF‑1。
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