[发明专利]使人的体细胞逆向分化产生自体视网膜干细胞和自体视网膜细胞的方法、试剂盒及用途

摘要

本发明提供了一种使人的体细胞逆向分化产生自体视网膜干细胞和自体视网膜细胞的方法，所述方法包括：采用含有不同植物提取物和蛋白成分的培养液分步骤培养人的体细胞，从而使所述体细胞逆向分化产生自体视网膜干细胞，及继续产生多种自体视网膜细胞。本发明在2-3周内即可产生数百亿的第1代自体视网膜干细胞。这种植物和蛋白诱导性人自体视网膜干细胞具有与人自然视网膜干细胞类似的细胞特异表型和多种细胞分化能力，该自体视网膜干细胞及自体视网膜细胞不仅对视网膜色素变性等疾病治疗领域有良好的应用前景，而且在再生医学、自体组织器官工程领域具有良好的潜在应用前景，并具有大规模工业化和产业化生产自体视网膜干细胞和视网膜细胞的可能性。

主权项

一种使人的体细胞逆向分化产生自体视网膜干细胞的方法，其中，所述方法包括：将人的体细胞在细胞培养液D1中培养72小时，所述细胞培养液D1为DMEM、并含有枸杞子提取物1‑100mg/ml、菊花提取物1‑100mg/ml、Y‑27632 5‑30μM、白细胞介素3(IL3)5‑30ng/ml、白细胞介素6(IL6)5‑30ng/ml、神经生长因子1‑100ng/ml、二甲亚砜(DMSO)5‑30μM；然后换用细胞培养液D2培养9‑15天，所述细胞培养液D2为DMEM、并含有枸杞子提取物1‑100mg/ml、菊花提取物1‑100mg/ml、水蛭提取物1‑100mg/ml、Y‑27632 5‑30μM、白细胞介素3(IL3)5‑30ng/ml、白细胞介素6(IL6)5‑30ng/ml、神经生长因子5‑30ng/ml、Dkk‑15‑30ng/ml、Lefty‑A 5‑30ng/ml；再换用细胞培养液D3继续培养10‑20天，D3培养液为DMEM、并含有枸杞子提取物1‑100mg/ml、菊花提取物1‑100mg/ml、水蛭提取物1‑100mg/ml、Y‑276325‑30μM、B272％(v/v)、白细胞介素3(IL3)5‑30ng/ml、白细胞介素6(IL6)5‑30ng/ml、神经生长因子5‑30ng/ml、Dkk‑15‑30ng/ml、Lefty‑A 5‑30ng/ml、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)5‑30ng/ml、血管内皮生长因子5‑30ng/ml、生长因子5‑30ng/ml从而获得植物和蛋白诱导性自体视网膜干细胞；优选地，在5％CO2和37℃条件下进行细胞培养。