[发明专利]瑶山苣苔组织培养及快速繁殖的方法

摘要

瑶山苣苔(Dayaoshania cotinifolia W.T.Wang)组织培养及快速繁殖的方法，本发明以分布于广西金秀县老山林场的野生瑶山苣苔叶片为外植体，通过筛选和优化初代诱导、继代增殖、生根和移栽培养基配方和培养条件，经过不定芽的初代诱导、继代增殖和生根培养以及试管苗的移栽阶段，实现珍稀濒危植物瑶山苣苔种苗的快速繁殖，为该物种的生物学研究、遗传改良、种质资源保护和可持续利用奠定基础。

主权项

瑶山苣苔组织培养及快速繁殖的方法，其特征在于，以野外采集的瑶山苣苔植株叶片作为外植体，按以下步骤进行组织培养和快速繁殖：(1)不定芽的初代诱导：将瑶山苣苔植株叶片外植体经表面消毒后接种到诱导培养基上，在温度25±3℃、光照强度20μmol·m‑2·s‑1、光照时间12h/d的条件下，培养100～140天，叶片外植体诱导形成愈伤组织和不定芽，其中，所用的初代诱导培养基为：MS+6‑BA 0.1～0.4mg·L‑1+KT 0.1～0.4mg·L‑1+IAB 0.04～0.05mg·L‑1+Mg2+50mg·L‑1+蔗糖30g·L‑1+琼脂6g·L‑1，pH 5.0；(2)芽的继代增殖：将愈伤组织和不定芽转入继代增殖培养基上，在温度25±3℃、光照强度40μmol·m‑2·s‑1、光照时间12h/d的条件下，培养50～60天，获得从生芽，繁殖系数4.6～5.0/60d，每60天继代一次，其中，所用的继代增殖培养基为：MS+2‑ip 0.05～0.2mg·L‑1+KT0.05～0.1mg·L‑1+IAB 0.02mg·L‑1+Mg2+50mg·L‑1+蔗糖30g·L‑1+琼脂6g·L‑1，pH 5.0；(3)生根培养：将丛生芽苗分切转入生根培养基上，在温度25±3℃、光照强度40μmol·m‑2·s‑1、光照时间12h/d的条件下，培养40天后获得长好根的试管苗，其中，所用的生根培养基为：1/2MS+2‑ip 0.01～0.05mg·L‑1+IAB 0.1～0.4mg·L‑1+Mg2+50mg·L‑1+活性碳0.5～1.0g·L‑1+蔗糖20g·L‑1+琼脂6g·L‑1，pH 5.0；(4)试管苗移栽：将长好根的试管苗移栽到移栽基质中，放置于遮荫、湿润的原生环境下培养，其中，所用的移栽基质为：腐质土和椰糠按1∶1混均，并添加Mg2+100mg/kg，将pH调至4.5～5.5。