[发明专利]一种分离纯化谷氨酰胺转胺酶的方法有效
申请号: | 201110034437.3 | 申请日: | 2011-02-01 |
公开(公告)号: | CN102146361A | 公开(公告)日: | 2011-08-10 |
发明(设计)人: | 王戈莎;郭宏明 | 申请(专利权)人: | 泰兴市一鸣生物制品有限公司 |
主分类号: | C12N9/10 | 分类号: | C12N9/10 |
代理公司: | 暂无信息 | 代理人: | 暂无信息 |
地址: | 225433 江*** | 国省代码: | 江苏;32 |
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摘要: | 本发明提供了一种分离纯化谷氨酰胺转胺酶的方法,它有效地提高了谷氨酰胺转胺酶的比酶活,解决了酶的颜色过深从而影响其应用等问题。本发明仅用一种阳离子交换树脂分离纯化出高纯度的谷氨酰胺转胺酶,方法简单,耗时短,收率高,且可大规模制备,放大到工业生产。 | ||
搜索关键词: | 一种 分离 纯化 谷氨酰胺 转胺酶 方法 | ||
【主权项】:
一种分离纯化谷氨酰胺转胺酶的方法,其特征在于具体步骤为:(1)在0‑10℃下,用体积为1‑5倍树脂量的浓度为0.02‑0.15mol/L的缓冲液平衡阳离子交换树脂,流速为1/2‑3柱体积/小时;(2)用体积为1/50‑1/8倍树脂量的谷氨酰胺转胺酶酶活为100‑1000U/ml的料液以1/2‑2柱体积/小时的流速通入平衡好的阳离子交换柱;(3)用体积为2‑5倍树脂量的浓度为0.02‑0.15mol/L的缓冲液以1/2‑2柱体积/小时的流速洗脱部分杂质;(4)再用体积为1/2‑5倍树脂量的洗脱剂浓度为0.1‑1mol/L的洗脱液以1/5‑2柱体积/小时的流速洗脱谷氨酰胺转胺酶;(5)收集所得的洗脱液,经过分子截留量为1000‑20000道尔顿的超滤设备进行浓缩,至浓缩后的酶浓缩液体积为浓缩前体积的1/5‑1/20;(6)用体积为酶浓缩液体积的1/5‑2倍、体积浓度为40%‑100%的乙醇溶液沉降,离心,得到沉淀;(7)将沉淀冷冻干燥,得到高比酶活的谷氨酰胺转胺酶成品。
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