[发明专利]一种检测Cry1Ab/Cry1Ac杀虫蛋白的免疫纳米磁颗粒及其制备方法

摘要

本发明公开了一种检测Cry1Ab/Cry1Ac杀虫蛋白的免疫纳米磁颗粒及其制备方法。本发明检测Cry1Ab/Cry1Ac杀虫蛋白的免疫纳米磁颗粒，由抗Cry1Ab/Cry1Ac杀虫蛋白多克隆抗体包被，磁颗粒大小150～200nm。该免疫纳米磁颗粒是通过改进的化学沉淀法制备具有高度水溶性的羧基纳米磁颗粒，再将抗Cry1Ab/Cry1Ac杀虫蛋白抗体通过化学偶联法偶联活化后的纳米磁颗粒而得到。使用该免疫纳米磁颗粒通过化学发光EIA法检测Cry1Ab/Cry1Ac杀虫蛋白样品，灵敏度较高，最大检测到的蛋白浓度是1000ng/ml，最小检测浓度是1ng/ml；而且易于磁富集而排除杂质分子干扰。

主权项

一种检测Cry1Ab/Cry1Ac杀虫蛋白的免疫纳米磁颗粒，其特征在于，该免疫纳米磁颗粒由抗Cry1Ab/Cry1Ac杀虫蛋白多克隆抗体包被，磁颗粒大小150～200nm，具体通过如下步骤制备：(1)将0.85～1.5g无水FeCl3和0.6～1.2g FeCl2·4H2O溶解于100ml超纯水中，加热搅拌至完全溶解；(2)在温度80‑85℃时，加入15～20ml 2～5M NaOH溶液于步骤(1)所得混合液中，反应2～5min，加入15～20ml 0.05～1.0M的PAA溶液，继续加热搅拌30min，得到水溶性羧基纳米磁颗粒；(3)将所述的水溶性羧基纳米磁颗粒在外加磁场作用下用无水乙醇洗涤3～5次，以超纯水分散保存；(4)将鼠抗Cry1Ab/Cry1Ac杀虫蛋白抗体，通过羧基‑氨基化学偶联法偶联所述的水溶性羧基纳米磁颗粒，得到检测Cry1Ab/Cry1Ac杀虫蛋白的免疫纳米磁颗粒。