[发明专利]高纯度、高细胞毒活性的γδT细胞的制备方法

摘要

本发明公开了一种高纯度、高细胞毒活性的γδT细胞的制备方法。属于体外细胞培养领域。方法包括：采集并分离患者外周血单个核细胞，先经Mini MACS分选得到γδT阳性细胞，再经磷酸抗原HDMAPP(3μM)激活，同时加入基因重组人细胞因子IL-2(100IU/ml)和IL-21(10ng/ml)，置于37℃，5％CO2的培养箱中孵育，4天后补充含有IL-2的培养基继续培养7-14天，即可得到高纯度、高细胞毒活性的γδT细胞。本发明利用免疫磁珠分选技术以获得高纯度的γδTCR阳性细胞，然后联用IL-2和IL-21共同刺激培养的γδT细胞，使其抗肿瘤功能增强；解决了现有技术体外扩增的γδT细胞纯度低及细胞毒活性低的问题。

主权项

一种高纯度、高细胞毒活性的γδT细胞的制备方法，其特征在于制备步骤如下：1)采集患者外周血，分离并收集外周血单个核细胞；2)用抗TCRγ/δ微珠试剂盒Mini MACS分选γδT细胞；3)用含10％自身血浆的培养基重悬上述获得的阳性细胞，经磷酸抗原HDMAPP活化后，加入细胞因子IL‑2和IL‑21培养3天；4)依据细胞生长状况每2‑3天补加含IL‑2的新鲜培养基继续培养7‑14天，获得高扩增倍数的γδT细胞。