[发明专利]一种从发酵液中分离提取西罗莫司的方法

摘要

本发明提出一种以逆流色谱为核心的西罗莫司快速分离提取方法，其提取流程如下：西罗莫司发酵菌丝体——萃取、脱色——高速逆流色谱分离——干燥。本发明采用逆流色谱分离技术，取代传统提取工艺的多次层析的步骤，采用萃取和逆流相结合，一次逆流分离可以得到纯度接近90%的雷帕霉素产品。相对复杂的雷帕霉素传统提取工艺相比，采用发酵菌丝体粗提后经高速逆流色谱方法具有分离路线简单，并且有利于工艺放大，适合于大规模从发酵液中快速分离制备高附加值雷帕霉素单体。本发明具有收率高，提取步骤简单、节省溶剂等优点，可应用于工业实际放大生产。

主权项

一种从发酵液中分离提取西罗莫司的方法，其步骤如下：（1）西罗莫司发酵菌丝体：取西罗莫司发酵液进行过滤或离心分离，去除发酵上清液，得西罗莫司菌丝体；（2）萃取、脱色：采用丙酮、甲醇或乙醇溶剂提取菌丝体1‑3次，萃取液进一步用乙酸乙酯进行萃取1~3次，用活性炭脱色，减压浓缩后得到西罗莫司粗提物；（3）高速逆流色谱分离：高速逆流色谱仪采用上海同田生物技术有限公司生产的TBE‑300A型、TBE‑1000A或TBE‑5000A型，分离方法为以正己烷‑乙酸乙酯‑乙醇‑水按体积比例 (4~9）‑(3~6)‑(4~8)‑（3~7）混合为两相溶剂系统，上相为固定相，下相为流动相，在流速2~5 mL/min，转速600~1000 r/min, 检测波长为280 nm条件下，取西罗莫司粗提物50~250mg溶解于下相中，进样，收集西罗莫司分离峰，得西罗莫司分离样品；（4）干燥：将西罗莫司分离样品溶液进行减压浓缩后，冷冻干燥，得到纯度较高的白色西罗莫司样品粉末。