[发明专利]一种甲烷氧化菌的定量检测方法

摘要

本发明公开了一种甲烷氧化菌的定量检测方法，包括采样；用PBS溶液对样品进行振摇洗菌；根据样品数量设计和选择带特定孔数的双层微孔滤膜板；菌体抽滤过膜固定、荧光染色和结果分析。根据微孔滤膜板上样品的荧光强度，定量计算土壤或沉积物样品中甲烷氧化菌的数量，为微生物油气勘探与微生物油气藏表征提供技术支持。

主权项

一种甲烷氧化菌的检测方法，其特征在于包括如下步骤：（1）采样，对土壤的采样深度为10 ~ 200 cm；采样量为20~2000 g；（2）采用PBS溶液对样品进行振摇法洗菌，将菌体洗脱到PBS上清溶液中；（3）采用双层96孔或384孔滤膜板，上层滤膜板孔径为5 μm，下层滤膜板孔径为0.2 μm，上层滤膜板用于去除颗粒状杂质，下层滤膜板用于截留甲烷氧化菌，甲烷氧化菌被截留在下层滤膜上；将截留住的甲烷氧化菌固定于96孔或384孔滤膜板上；（4）取掉上层微孔滤膜板，并向下层滤膜板加入经FITC标记的pMMO单克隆抗体，加入的标记单克隆抗体分子个数需超过孔板滤膜上固定的甲烷氧化菌数量的3倍以上；抗体特异性结合后，将孔板加PBST溶液进行抽滤，重复3‑5次，将滤膜上尚未结合的单克隆抗体完全除去；（5）用荧光显微镜对孔板滤膜上样品的荧光强度进行观察和分析。