[发明专利]一种大白菜真叶离体再生培养方法

摘要

本发明公开了一种大白菜真叶离体再生培养方法，该方法在传统大白菜组织培养的基础上首次采用了以真叶为外植体，从适宜苗态、切割方式和接种方式及激素浓度几个方面，优化了大白菜真叶离体再生体系。该培养方法仅需在常规的MS基本培养中添加6-BA和NAA，方法简单、易操作；同时，培养出来的不定芽数目多、质量好、健壮、没有畸形，再生率高，再生周期短。为获得大白菜转基因的受体新材料提供了新的途径，对利用现代基因工程技术创新大白菜种质和新品种将具有重要的现实意义。

主权项

一种大白菜真叶离体再生培养方法，其特征在于，按照下列步骤进行：1）挑选籽粒饱满的大白菜种子，在无菌条件下，先用体积百分比为70%的酒精表面杀菌0.5min～1min，再用质量浓度为3%的NaClO溶液灭菌13～15min，然后用无菌水反复冲洗4～5次，每次5 min；最后将种子播种于常规的1/2MS基本培养基的表面，在温度为25±1℃，光照时间16h/d，光照强度2000lx的条件下培养；2）当培养9～10d，幼苗生长直立后，选择生长健壮且第一片真叶完全展开，第二片真叶刚露出的植株，在其真叶柄基部和下胚轴交接处即生长点处横切，使切口处靠近生长点，但不保留生长点，并保持切口平滑，选择第一片真叶为外植体；3）将该真叶以真叶柄的下端竖直向下插入装有1号培养基的培养瓶中，并使真叶柄的下端与瓶底保持0.15cm的距离，且勿使外植体与1号培养基相接触，以免外植体玻璃化，在温度25℃±1℃，光照时间16h/d，光照强度2000lx的条件下培养9d～17d，当外植体的不定芽长在0.8cm～１.5mm时，将外植体取出，在距原切口处0.8cm处切下，保留再生芽和部分外植体，随后将其再生芽朝上，外植体切开部分向下再竖直插入装有1号培养基的培养瓶中，在温度25℃±1℃，光照时间16h/d，光照强度2000lx的条件下复壮培养10d～12d，再生芽生出丛生芽；4）将丛生芽的各个芽点切开，转入装有2号培养基培养瓶中生根，待幼苗基部形成大量的毛根后，炼苗5d～6d，取出幼苗植株，洗净根部的2号培养基，移栽到装有体积比为珍珠岩∶草炭为1∶3混合基质营养钵中，用塑料薄膜保湿7d，然后逐渐揭去塑料薄膜，10d～15d即可入土栽培。