[发明专利]一种通过带病组培诱导获得抗枣疯病突变株的方法

摘要

以带枣疯病组培苗为材料，通过持续带病继代培养，利用带病组培苗中高浓度的病原形成强大选择压，诱发抗枣疯病突变，进而通过形态变异筛选及形态变异稳定性观察、分子水平遗传变异鉴定和对枣疯病抗性的组培微嫁接鉴定等，筛选出对枣疯病抗性显著提高的突变株。利用该技术，可实现在组织培养条件下规模化快速诱导获得抗枣疯病新种质，其应用有助于推动抗枣疯病育种的进程，有利于枣产业的持续健康发展。

主权项

一种通过持续带病组培诱导获得抗枣疯病突变株的方法，其特征在于包括以下步骤：(1)带枣疯病组培苗材料的准备。以感染枣疯病的嫩芽为外植体，在不加入任何植物生长调节剂的MS培养基中进行启动培养和继代培养，获得大量的带病组培苗。(2)疑似突变株的初步筛选。在步骤(1)获得的带病组培苗中，以叶片明显变大、茎增粗、节间伸长、托叶刺不可见或变正常、腋芽不萌发或正长萌发为标准，挑选出在外观形态上看似健康的疑似突变株。(3)疑似突变株的复选。将步骤(2)初选出的疑似突变株，在不加任何植物生长调节剂的MS培养基中单独继代培养，观察其外观形态的分化情况；将外观形态仍表现健康的疑似突变株的继代组培苗再次挑选出来，继续在不加任何植物生长调节剂的MS培养基中单独培养；如此反复进行继代培养和挑选，直到疑似突变株在继代培养后不再出现形态分化、全部表现为外观形态健康的植株为止，作为复选突变株。(4)突变株的决选和确定。对步骤(3)筛选出的复选突变株进行基因组DNA的AFLP(扩增片段长度多态性，Amplificd fragment length polymorphism)分子标记检测，以一直表现典型枣疯病症状、未发生疑似突变的同一品种的组培苗为对照，鉴定出具有特征性DNA差异条带的突变株，作为决选突变株；进而以其为接穗，在组培条件下嫁接到表现典型枣疯病症状的组培苗砧木上，进行枣疯病抗性鉴定，接穗芽萌发45天后仍不表现枣疯病症状的，确定为抗枣疯病突变株。