[发明专利]一种减毒活菌卡介苗对哮喘影响的检测方法

摘要

本发明公开了一种减毒活菌卡介苗对哮喘影响的检测方法，通过对实验小动物建立哮喘模型并多次进行减毒活菌卡介苗接种，以Western Blotting检测实验小动物肺组织TLR4的表达。经本发明的减毒活菌卡介苗对哮喘影响的检测方法，分析得出，卡介苗对哮喘的治疗作用可能与肺组织TLR4上调有关，继而得出减毒活菌卡介苗对哮喘发病的治疗中发挥重要作用。

主权项

一种减毒活菌卡介苗对哮喘影响的检测方法，其特征在于，具体步骤为：1)准备实验动物与试剂：准备实验用小动物、卵白蛋白、减毒活菌卡介苗、抗TLR4单克隆抗体、抗GAPDH单克隆抗体和HRP标记的小鼠IgG抗体；2)实验动物的分组及致敏模型制备：实验小动物随机分为小动物只数相等的三组，分别为空白对照组、哮喘发病组和减毒活菌卡介苗干预组，哮喘发病组：第1、7、14天腹腔注射卵白蛋白致敏，以Al(OH)3作为免疫佐剂，第15天开始雾化激发，建立哮喘模型；减毒活菌卡介苗干预组：哮喘模型的建立同哮喘发病组，在每次致敏前1天和最后雾化激发1小时内进行减毒活菌卡介苗皮内注射；空白对照组：用生理盐水代替卵白蛋白，所有小动物在最后一次激发24h后获取标本；3)小动物肺组织TLR4蛋白的Western Blotting检测：取各组实验小动物肺组织提取总蛋白，测定浓度。各组蛋白样品SDS‑PAGE电泳后，电转移至PVDF膜上；PVDF膜经封闭2h后，用稀释后的TLR4单克隆抗体，孵育过夜；再进一步与辣根过氧化物酶偶联的二抗孵育后，滴加化学发光底物，X‑光胶片感光检测蛋白信号；4)数据统计：所有实验结果进行统计分析。