[发明专利]一种双壳贝类线粒体COI基因扩增引物的筛选方法

摘要

一种双壳贝类线粒体COI基因序列扩增引物的筛选方法，其特征是a、登陆美国国立生物技术信息中心，下载双壳贝类的线粒体全序列；b、将下载的序列用BioEdit比对分析，确定其保守区域；c、在保守区域内用Primer Premier 5设计多对引物并合成；d、提取双壳贝类DNA，将合成的引物在相应反应体系下进行PCR扩增；e、进行电泳检测，筛选出扩增效率高的一组步移鸡尾引物，此组步移鸡尾引物由三条正向引物和三条反向引物组成。采用本发明的双壳贝类线粒体COI引物，可以有效的扩增出双壳贝类不同物种的目的片段，对基于COI序列的双壳贝类物种分类鉴定和质资源保护、养殖业发展及渔业资源管理等都具有极其重要的意义。

主权项

一种双壳贝类线粒体COI基因扩增引物的筛选方法，其特征是a、登陆美国国立生物技术信息中心，下载双壳贝类的线粒体全序列；b、将下载的序列用BioEdit软件比对分析，确定序列两端保守区域；c、在确定的保守区域用引物设计软件Primer Premier 5设计多对引物并合成；d、提取双壳贝类DNA，然后将合成的引物在相应反应体系下进行PCR扩增；e、进行琼脂糖凝胶电泳检测，筛选出扩增效率高的一组步移鸡尾引物，此组步移鸡尾引物由三条正向引物和三条反向引物组成，其正向引物为BZ‑1：TGT AAA ACG ACG GCC NAM NWM HCA YWW RGA YRT、BZ‑2：TGT AAA ACG ACG GCC AGT TTC MCA TAA RGA YGT HG和BZ‑3：TGT AAA ACG ACG GCC AGM NWT HCA YWW RGA YRT HGG DAS，反向引物为ZF‑1：CAG GAA ACA GCT ATG ACY TCW GGR TGN CCA AAR AAY CA、BF‑2：CAG GAA ACA GCT ATG ACY TCW GGR TGN CCR AAR AA和BF‑3：CAG GAA ACA GCT ATH ACY TCD GGR TGN CCR AA。