[发明专利]一种柑橘全爪螨微卫星富集文库的构建方法有效
| 申请号： | 201110063902.6 | 申请日： | 2011-03-17 |
| 公开（公告）号： | CN102174714A | 公开（公告）日： | 2011-09-07 |
| 发明（设计）人： | 王进军;袁明龙;豆威;魏丹丹;王保军 | 申请（专利权）人： | 西南大学 |
| 主分类号： | C40B50/06 | 分类号： | C40B50/06;C12N15/10;C12N15/63;C12Q1/68 |
| 代理公司： | 重庆弘旭专利代理有限责任公司 50209 | 代理人： | 周韶红 |
| 地址： | 400716 *** | 国省代码： | 重庆;85 |
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| 摘要： | 一种柑橘全爪螨微卫星富集文库的构建方法，采用磁珠富集法，集成已报道的微卫星位点筛选策略，通过基因组DNA提取、酶切、接头连接、磁珠富集及文库构建等一系列步骤，建立柑橘全爪螨微卫星富集文库。该方法将酶切和接头连接一步化，可成功构建柑橘全爪螨微卫星富集文库，微卫星阳性克隆率从10%提高到30%以上。因此，本方法特别适合于开发柑橘全爪螨等微小昆虫及螨类的微卫星标记。此外，该方法简便易行，无污染，不需要特别的实验仪器，一般实验室均可成功开展。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 柑橘 全爪螨微 卫星 富集 文库 构建 方法 | ||
【主权项】：
一种柑橘全爪螨微卫星富集文库的构建方法，其特征在于，提取柑橘全爪螨高分子量的的基因组DNA，采用Sau3AI或MseI进行酶切，酶切后，立即与特异性接头进行连接；PCR扩增检测酶切及接头连接是否成功，并选择性回收400‑700 bp的片段，然后进行磁珠富集；采用PCR扩增将富集的单链微卫星片段转换为双链DNA，并回收400‑700 bp的片段，最后转化大肠杆菌，构建成微卫星富集文库；菌落PCR检测富集文库的微卫星阳性克隆并测序。
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