[发明专利]用于检测乙型肝炎病毒耐药突变位点的引物及方法

摘要

本发明公开了一种用于检测乙型肝炎病毒耐药突变位点的引物及方法。本发明提供了用于乙型肝炎病毒耐药突变位点检测的4对PCR引物，以这4对PCR引物扩增乙型肝炎病毒基因组DNA，获得的4个片段以重叠的方式覆盖整个乙型肝炎病毒逆转录酶基因序列。本发明将4段PCR片段以等摩尔比混合制成逆转录酶基因文库，经454高通量测序和生物信息学分析，能够检测乙型肝炎患者血清样本中的乙型肝炎病毒是否含有耐药性突变位点。本发明能够检测到患者血清中占1%以上的乙型肝炎病毒耐药突变，具有敏感性高、操作简单、通量大等优点，一次测序可以进行多个样本耐药突变位点的分析。

主权项

一种用于检测乙型肝炎病毒耐药突变位点的引物，其特征是根据基因库中能够检索到的乙型肝炎病毒基因组核苷酸序列进行同源性分析，设计以下四对引物：第一对是F1片段的引物F1f和F1r，其中：F1f的序列为：CGTATCGCCTCCCTCGCGCCATCAGACGAGTGCGTCTGCTGGTGGCTCCAGTTCF1r的序列为：CTATGCGCCTTGCCAGCCCGCTCAGACGAGTGCGTACAAACGGGCAACATACCTTG第二对是F2片段的引物F2f和F2r，其中： F2f的序列为：CGTATCGCCTCCCTCGCGCCATCAGACGAGTGCGTATCGCTGGATGTGTCTGCGGF2r的序列为：CTATGCGCCTTGCCAGCCCGCTCAGACGAGTGCGTTGTACAGACTTGGCCCCCAA第三对是F3片段的引物F3f和F3r，其中：F3f的序列为：CGTATCGCCTCCCTCGCGCCATCAGACGAGTGCGTCTTTCCCCCACTGTYTGGCF3r的序列为：CTATGCGCCTTGCCAGCCCGCTCAGACGAGTGCGTTTGGCGAGAAAGTRAAAGCCTG第四对是F4片段的引物F4f和F4r，其中：F4f的序列为：CGTATCGCCTCCCTCGCGCCATCAGACGAGTGCGTAAYAGRCCTATTGATTGGAAAGTF4r的序列为：CTATGCGCCTTGCCAGCCCGCTCAGACGAGTGCGTCYAGGAGTTCCGCAGTATGG。