[发明专利]一种适于提取多种果树总RNA的方法

摘要

本发明公开了一种适于提取多种果树总RNA的方法，其特征在于取少量果树新鲜材料至液氮中速冻、研磨后置入离心管，加入提取缓冲液温浴；温浴后加入氯仿-异戊醇，混匀、离心，取上清液；向上清液中加入高浓度氯化锂，冰浴、离心，所得沉淀用溶解缓冲液溶解后再加入氯仿-异戊醇，混匀、离心，取上清液；向上清液加入异丙醇后离心，所得沉淀用乙醇洗涤、干燥、溶解，在-80℃保存。用本方法提取果树RNA只需0.1g-0.15g材料，2小时内可以完成整个提取；本方法提取成本低，重复性好，获得的RNA质量和纯度高，适于苹果、桃和葡萄等多种果树。

主权项

一种适于提取多种果树总RNA的方法，其特征在于以下操作：a.用经DEPC处理过的水配制含有2mol/L的氯化钠、2mmol/L的亚精胺、25mmol/L pH8.0的乙二胺四乙酸、100mmol/L pH8.0的三羟甲基氨基甲烷、质量/体积百分比浓度2％的十六烷基三甲基溴化铵、质量/体积百分比浓度2.5％的聚乙烯吡咯烷酮30或聚乙烯吡咯烷酮40以及体积/体积百分比浓度2％的β‑巯基乙醇的RNA提取缓冲液，同时用经DEPC处理过的水配制含有1mol/L的氯化钠、10mmol/L pH8.0的乙二胺四乙酸、10mmol/L pH8.0的三羟甲基氨基甲烷以及质量/体积百分比浓度1％的十二烷基磺酸钠的RNA溶解缓冲液；b.取离心管，向离心管中加入800μl‑1000μl的RNA提取缓冲液，在65℃预热5min‑8min；c.从平邑甜茶或葡萄或新疆野苹果或桃树上取0.1g‑0.15g新鲜、幼嫩的器官或组织，在液氮冷冻条件下磨碎后转入步骤b预热的离心管中，剧烈涡旋1min，于65℃温浴8min‑10min；d.向步骤c温浴的离心管中加入与RNA提取缓冲液等体积的、体积比为24∶1的氯仿‑异戊醇混合液，或者体积比为25∶24∶1的水饱和酚‑氯仿‑异戊醇混合液，充分混匀后，在4℃下按照10000rpm‑12000rpm离心10min‑15min；e.将步骤d离心所得上清液转入另一离心管，向管中加入9mol/L‑12mol/L的LiCl水溶液，使LiCl终浓度达到2.8mol/L‑3.5mol/L；冰浴25min‑35min，在4℃下按照15000rpm‑16000rpm离心20min‑25min后弃上清液，保留沉淀；f.向步骤e保留沉淀的离心管中加入400μl‑600μl的RNA溶解缓冲液，当沉淀溶解后，向离心管中加入与RNA溶解缓冲液等体积的、体积比为24∶1的氯仿‑异戊醇，于4℃下按照10000rpm‑12000rpm离心10min‑12min；g.将步骤f离心所得上清液转入另一离心管，向管中加入体积为上清液体积65％‑75％的冷异丙醇，在4℃下按照15000rpm‑16000rpm离心10min‑12min后弃上清液，保留沉淀；h.将步骤g离心所得沉淀用体积分数为70％‑75％乙醇洗涤后干燥，用经DEPC处理过的水溶解后保存于‑80℃备用。