[发明专利]肠道病毒71型感染性克隆及构建方法有效
| 申请号： | 201110082256.8 | 申请日： | 2011-04-24 |
| 公开（公告）号： | CN102212554A | 公开（公告）日： | 2011-10-12 |
| 发明（设计）人： | 郑海学;李建强;曹伟军;杨帆;王玉琳;刘湘涛 | 申请（专利权）人： | 中国农业科学院兰州兽医研究所 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85;C12N7/00;C12R1/93 |
| 代理公司： | 兰州振华专利代理有限责任公司 62102 | 代理人： | 张晋 |
| 地址： | 730046 甘肃*** | 国省代码： | 甘肃;62 |
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| 摘要： | 本发明公开一种肠道病毒71型感染性克隆及其构建方法。本发明的肠道病毒71型感染性克隆的构建方法是：从EV17病毒毒株提取的RNA为模板，用下述三对引物分别扩增出L1、L2和L3三个片段；再将L1片段经酶切后与真核表达载体连接，再转化至大肠杆菌中获得亚克隆质粒PL1，再将经PL1质粒与L2片段经酶切后连接转化为质粒PL2，再将质粒PL2与L3片段经酶切后连接转化，获得含L1、L2和L3片段的全基因组cDNA克隆的重组质粒；再将重组质粒转染至非洲绿猴肾细胞宿主细胞，得到EV711型感染性克隆。 | ||
| 搜索关键词： | 肠道病毒 71 感染性 克隆 构建 方法 | ||
【主权项】：
肠道病毒71型感染性克隆的构建方法，其特征是：a.以从EV17病毒毒株提取的RNA为模板，用下述三对引物分别扩增出L1、L2和L3三个片段，所用的三对引物为：L1上游引物：atagtcttaattaatgttaagcgtctgatgagtccgtgaggacgaaactataggaaaggaattcctatagtcL1下游引物：gaagaagcttcaagcacgtacgggtgttgcaactcgaagL2上游引物：ttaagaagcttgcaggcggtacagggacggaagatL2下游引物：tttgagatctgattctctagaagtggcagctgtL3上游引物：tcacttctagagaatcagatctcaaatttggaacaatL3下游引物：ttttctagagcggccgct38；b.将L1片段经酶切后与真核表达载体连接，再转化至大肠杆菌中获得亚克隆质粒PL1，再将经PL1质粒与L2片段经酶切后连接转化为质粒PL2，再将质粒PL2与L3片段经酶切后连接转化，获得含L1、L2和L3片段的全基因组cDNA克隆的重组质粒；c.将b所得到的含L1、L2和L3片段的全基因组cDNA克隆的重组质粒转染至非洲绿猴肾细胞宿主细胞，得到EV711型感染性克隆。
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