[发明专利]一种短颈剑线虫的分子鉴定方法

摘要

本发明公开了短颈剑线虫的鉴定方法，包括以下步骤：提取待测线虫的DNA；使用正向引物、反向引物、探针序列进行实时PCR；根据Ct值的不同，判断线虫是否为短颈剑线虫。本发明方法可快速、准确、稳定的鉴别线虫是否为短颈剑线虫。

主权项

一种短颈剑线虫实时荧光PCR检测方法，包括以下步骤：（1）取待检样品，提取基因组DNA，制备模板DNA；（2）建立PCR反应体系：取正向引物XB‑F、反向引物XB‑R、引物探针XB‑P、10×PCR缓冲液、MgCl2、dNTP混合物、Taq DNA聚合酶和ddH2O，加入待检模板DNA，配成PCR反应体系；其中所述正向引物CC‑F6、反向引物CC‑R8和探针CC‑TZ‑6的核苷酸序列分别为：正向引物：XB‑F  5’‑CGTAACCAGCTCGTTCGGTAGA‑3’（SEQ ID NO 1），反向引物： XB‑R  5’‑TCGATGCACACATATAGATCCG ‑3’ （SEQ ID NO 2），探针序列：XB‑P 5’‑FAM‑GAACCTGCGAGCAGGTACCGA‑TAMRA‑3’FAM为荧光报告基团，TAMRA为荧光淬灭基团；（3）进行PCR扩增；（4）荧光PCR仪读取Ct值判断检测的结果。