[发明专利]转录因子ORCA3和关键酶G10H双基因共转化提高喜树碱含量的方法无效
| 申请号： | 201110084106.0 | 申请日： | 2011-04-02 |
| 公开（公告）号： | CN102212550A | 公开（公告）日： | 2011-10-12 |
| 发明（设计）人： | 开国银;李姗姗;王伟;付雪晴;尤丽佳 | 申请（专利权）人： | 上海师范大学 |
| 主分类号： | C12N15/82 | 分类号： | C12N15/82;A01H5/06 |
| 代理公司： | 上海伯瑞杰知识产权代理有限公司 31227 | 代理人： | 吴瑾瑜 |
| 地址： | 200234 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明是一种生物技术领域的提高喜树毛状根中喜树碱含量的方法。从长春花中克隆出CrORCA3和CrG10H基因的编码框序列，构建含上述基因的植物双价高效表达载体，以发根农杆菌介导法遗传转化喜树获得转CrORCA3和CrG10H基因的喜树毛状根。本发明获得的转基因喜树毛状根中喜树碱含量显著提高，喜树碱含量为对照的5.4倍，羟基喜树碱含量为对照的2.3倍。单独转CrORCA3基因的毛状根喜树碱含量比对照提高了1.5倍，单独转CrG10H基因的毛状根喜树碱含量并无明显提高。本发明提供了一种提高喜树毛状根中喜树碱含量的方法，也为生产具重要临床需求的抗癌药物喜树碱和羟基喜树碱提供了一种新方法。 | ||
| 搜索关键词： | 转录 因子 orca3 关键 g10h 基因 转化 提高 喜树碱 含量 方法 | ||
【主权项】：
转录因子ORCA3和关键酶G10H双基因共转化提高喜树碱含量的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)将转录因子基因CrORCA3和香叶醇‑10‑脱氢酶基因CrG10H插入植物表达载体，构建重组载体；(2)将步骤(1)所获得的重组载体转入发根农杆菌，构建含有重组载体的发根农杆菌；(3)利用所构建的含有重组载体的发根农杆菌菌株遗传转化喜树，获得毛状根；(4)检测步骤(3)毛状根中的CrORCA3和CrG10H基因，取筛选结果为阳性的转基因毛状根克隆。
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