[发明专利]用于检测马梨形虫的试剂盒及制备与使用方法

摘要

本发明公开一种用于鉴别诊断马属动物是否感染梨形虫病的检测试剂盒及其制备与使用方法。本发明的检测马梨形虫试剂盒内有检测马梨形虫的检测膜和梨形虫通用引物。本发明的试剂盒的使用方法是从待检马匹血液中提取DNA，再用梨形虫通用引物进行扩增，将扩增产物与检测膜结合，将PCR产物末端的生物素与链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶(streptavidin-peroxidase)作用后，能催化过氧化物酶的底物增强化学发光试剂(ECL-detection)发出荧光，使X感光胶片曝光；胶片经显影和定影处理后，与检测膜上探针与PCR产物发生特异性杂交的相对应的区域出现阴影，根据胶片上有无留下阴影来判断被检动物是否有患有梨形虫病。

主权项

用于检测马梨形虫的试剂盒，其特征是试剂盒内有检测马梨形虫的检测膜和梨形虫通用引物，其中：检测马梨形虫的检测膜是在Biodyne C膜的不同区域分别固定有如下述的五种核苷酸序列的探针：梨形虫通用探针(C‑all)CTGTCAGAGGTGAAATTCT；巴贝斯虫通用探针(B‑all)CCTTRGTAATGGTTAATAGGAA；驽巴贝斯虫特异探针(B‑cab)AAACCCTCGCCAGAGTAACAATT；泰勒虫通用探针(T‑all)WVCCRRAGTAATGGTTAATAGG；马勒虫特异探针(T‑equi)TTTTAGGAGCCRGAGTAATGGTTA；以上序列中的R、W或V是兼并碱基，其中：R＝A或G；W＝A或T；V＝A或C或G；梨形虫通用引物为：上游引物RLB‑F：(5’‑gaggtagtgacaagaaataacaata‑3’)；下游引物RLB‑R：(biotin‑5’‑tcttcgatcccctaactttc‑3’)。